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rriangle

新虫 (初入文坛)

[求助] 求帮忙!!目的基因Ct值很高 已有2人参与

本人是新手,最近在做荧光定量PCR,用的是THERMO公司的仪器,cDNA稀释10倍后,内参GADPH ct值都在25左右,但是几个目的基因都在30多,要不然就是非数字,然后我又把cDNA稀释5倍,GADPH ct值在15左右,目的基因还是在30多,要不然就是非数字,好不容易有个目的基因跑出来了,结果实验组的相对量比对照组还低,我想知道是引物不好么?我的引物是生工的,还有内参跑出来了是不是说明我的cDNA没有问题?因为我是组织,以前也没做过,我怕被我污染了,多谢各位大神赐教啊。。。!!!
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yzj926521

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
目的基因表达量太低了,试一下2倍稀释或者用25ul体系扩增,多换条件试试吧
我最近做的一个基因也是表达量很低,ct都大于30了,正在调整中
2楼2014-09-19 16:54:24
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bullfrog325

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-09-19 23:49:23
"cDNA稀释10倍后,内参GADPH ct值都在25左右" vs. "又把cDNA稀释5倍,GADPH ct值在15左右"

楼主你到PCR很有问题, 不可能两倍的模版浓度会产生这么大的Ct差距
3楼2014-09-19 19:38:25
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rriangle

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by bullfrog325 at 2014-09-19 19:38:25
"cDNA稀释10倍后,内参GADPH ct值都在25左右" vs. "又把cDNA稀释5倍,GADPH ct值在15左右"

楼主你到PCR很有问题, 不可能两倍的模版浓度会产生这么大的Ct差距

那到底是哪里出现问题了呢`
4楼2014-09-28 22:37:56
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by小宁

木虫 (初入文坛)

亲  你后来怎么解决的啊?
5楼2015-07-08 14:25:00
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南宫紫玉

新虫 (正式写手)

我也遇到了类似的情况,不过我的cDNA质量应该没有问题,跑出来的内参Ct值在25左右,感觉不是很好,一直想调低一点呢!做了几个月了,试了好多方法,还正在摸索中.....
6楼2015-07-28 23:50:57
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南宫紫玉

新虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by by小宁 at 2015-07-08 14:25:00
亲  你后来怎么解决的啊?

我也遇到了类似的情况,不过我的cDNA质量应该没有问题,跑出来的内参Ct值在25左右,感觉不是很好,一直想调低一点呢!做了几个月了,试了好多方法,还正在摸索中.....你的问题解决了没呢?
7楼2015-07-28 23:52:52
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adaju

铁虫 (初入文坛)

亲,你解决了吗
明天和意外,你永远不知道哪一个先到。
8楼2016-03-11 12:31:25
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空谷素雪

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yzj926521 at 2014-09-19 16:54:24
目的基因表达量太低了,试一下2倍稀释或者用25ul体系扩增,多换条件试试吧
我最近做的一个基因也是表达量很低,ct都大于30了,正在调整中

你好,如果目的基因的表达量太低的话,不可以cDNA稀释的时候,目的基因用一个稀释度,内参基因用一个稀释度吗?
9楼2018-12-13 16:37:18
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