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a83875785铁杆木虫 (著名写手)
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[交流]
【求助/交流】什么是核蛋白什么是总蛋白？做western的时候有什么区别？ 已有3人参与
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本人是新手，看别人做western 的时候总是分核蛋白和总蛋白，请问什么是核蛋白什么是总蛋白？做western的时候有什么区别？ 另外在公司里买的是不是一抗和二抗，而检测的那些蛋白如sirt1，caspase，HDAC cyclin等 都是人体内本身就表达出来的蛋白？我的理解不知道正确吗？谢谢啦 |
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lstt09nk: 很明显的是在做广告，警告下！！ 2011-03-27 12:01:23
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主要是看所研究的目的蛋白质的位置，如果是在核中，可以用核蛋白提取试剂盒，如果有位于胞质中的，也有膜上的，也有核中的，可以用总蛋白提取试剂盒，上海生工就有 全蛋白提取试剂盒 Tissue or Cell Total Protein Extraction Kit 产品说明：本试剂盒用于从哺乳动物组织和培养细胞中提取全蛋白， 用含有蛋白酶抑制剂及磷酸酶抑制剂的裂解缓冲液Lysis Buffer匀浆裂解组织或细胞，作用温和，提取过程简便高效,可以提取出培养细胞或动物组织中的决大多数蛋白质。获得的全蛋白可用于Western Blot、免疫共沉淀，酶活性分析，Pull down,EMSA等后续研究，但不能用于蛋白激酶及磷酸酶免疫共沉淀的研究，因本试剂盒中包括这两种酶的抑制剂，可以每次从107个培养细胞或200mg动物组织提取蛋白质，本试剂盒可以使用50次。储存条件：2～8℃。 产品特点： 1．提取的蛋白质包括膜,核,核基质和胞质蛋白,而且最大限度保持蛋白质活性； 2．整个操作过程只需要30分钟左右； 3．即可以用于培养细胞（50x107个），有可以用于动物组织（50x200mg）蛋白质的提取； 4．避免蛋白酶和磷酸酶对蛋白质的降解，保持蛋白质的完整性和天然活性； 5．不需要超速度离心，可以同时处理多个样品。 编号 包装 价格 产地 BSP003 50 Assays 520 生工 细胞核蛋白质提取试剂盒 Nucleoprotein Extraction Kit 产品说明：本试剂盒提供独特的组份，采用特殊的非离子型去污剂，以及焦磷酸钠等数种蛋白磷酸酶和蛋白酶抑制试剂，能够在非变性和低渗的条件下裂解细胞，经过洗涤去除大部分胞质蛋白和膜蛋白，释放的细胞核能够保持完整，再用Lysis Buffer对细胞核蛋白质进行抽提的同时可以保持核蛋白质的活性，因此该产品可合适用于SDS-PAGE电泳、Western Blot、免疫共沉淀，EMSA，Pull Down, 转录调控等后续蛋白质或分子生物学相关实验的研究，每次可以从107个培养细胞或200mg动物组织提取核蛋白质，本试剂盒可以使用50次。储存条件：2-～8℃ 产品特点： 1．提取的核蛋白质可以最大限度的保持蛋白质的活性，可以用于EMSA，转录因子分析的实验; 2．可以从50x107个培养细胞或50x200mg动物组织提取核蛋白; 3．整个实验过程只需要45分钟左右; 4．在提取的过程中，最大限度的减少了膜和胞质蛋白对核蛋白的污染; 5．不需要超速度离心，可以同时处理多个样品。 编号 包装 价格 产地 BSP009 50 Assays 300 生工 |
2楼2011-03-26 17:01:54
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 生工男，人家不是问试剂盒的问题，不要不遗余力地推销你们家的产品好不？你自己用过吗？好用吗？不要一味地给别人推销，自己没有亲身用过就请那啥~~~ 总蛋白意思就是一个细胞所有的蛋白，包括膜蛋白、胞浆蛋白（细胞质和细胞器的）以及核蛋白 核蛋白就是细胞核含有的蛋白 一般情况下，都以总蛋白为基础就好了 但是如果你想了解某个蛋白是否发生了诸如入核出核的状态，那么就需要分别提取核蛋白和胞浆来检测，因为总蛋白量是不会变的，变的只是位置 做WB，去公司买的是针对那些蛋白的抗体，一般都会写成anti-xxxx sirt1，caspase，HDAC cyclin，你提到的这些都是你要检测的样本中本身含有的蛋白 |
3楼2011-03-26 17:19:48
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4楼2011-03-26 19:29:10
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5楼2011-03-27 10:50:45
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您好，我现在是做了两次western,用的是碧云天的核蛋白提取试剂盒，第一次核蛋白杂带多，第二次降低抗体浓度，没有条带了，怎么办？ 发自小木虫Android客户端 |
7楼2017-04-06 21:15:05
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