24小时热门版块排行榜    

查看: 3378  |  回复: 4
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

czcpudai

铜虫 (正式写手)

[求助] 细胞提取蛋白,做western blotting,怎么知道是提取总蛋白还是膜蛋白呢?

各位做过Western blotting的同仁们,本人最近要从细胞中提取蛋白做WB,通过与内参比较,看看药物对细胞内抗氧化蛋白表达量的影响,我想问一下,我提取的蛋白应该是胞内总蛋白呢,还是根据这些抗氧化蛋白在细胞中的位置来选择不同的提取试剂。每种蛋白在细胞内的位置已经找到,有的是在线粒体中,有的是在细胞质中,要是提取的话,该怎么选择试剂呢?由于是第一次接触这种情况,不是很懂,请各位帮助一下!谢谢!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-06-11 21:20:40
如果你的目的基因定位在特定的细胞器里面,分离细胞器后目的蛋白的相对浓度会提高,对研究它的功能和调控也更方便。但是如果你不知道目的蛋白的定位,先提一个总蛋白做western就可以了。所谓可溶蛋白就是用超速离心后还存在在上清里面。如果是膜蛋白的话会和膜及亚细胞结构一起沉降下来。
4楼2013-01-05 08:45:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

oldflying

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
提取总蛋白就可以了吧,只需要与对照组在抗氧化蛋白相应的位置做比较就可以看出差别。分离不同细胞部位的蛋白质,操作起来难度还是比较大的。
一个人的努力和坚持!
2楼2013-01-05 08:29:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhang881007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
如果你想提取不同细胞器中的蛋白,那就离心分离细胞器,如果是总蛋白,就加去垢剂。可溶性蛋白则不用去垢剂!
shine
3楼2013-01-05 08:38:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖


kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-06-11 21:20:50
你先对于你的目的蛋白质加以定位,看是在细胞的什么部位,然后在粉碎细胞时分级分离细胞成分,根据需要留下不同的细胞组分,在进行进一步分离,如果是膜蛋白则要用去垢剂或者表面活性剂,不要一次体总蛋白质,分离起来很麻烦的。
5楼2013-06-09 21:08:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 我面上完蛋了 +9 且听虎啸 2026-08-20 10/500 2026-08-24 20:08 by 苦寒来香
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +21 koalala 2026-08-24 24/1200 2026-08-24 19:25 by 家与远方
[基金申请] 人气不行了 +9 fansofjerry 2026-08-21 9/450 2026-08-24 17:48 by zhaozhengxin
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +17 羊腰板 2026-08-21 19/950 2026-08-24 16:52 by iaeyuan
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 21/1050 2026-08-24 14:21 by refreshing11
[基金申请] 估计是周四 +4 archvillain 2026-08-18 4/200 2026-08-24 13:53 by zzuzxg
[基金申请] 朋友圈看到的 +7 wangzilk 2026-08-18 9/450 2026-08-24 10:50 by cmrandy
[基金申请] 什么时候开奖? +10 CrisMessi 2026-08-18 11/550 2026-08-24 06:50 by 开心的小狮子
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +4 process2012 2026-08-23 5/250 2026-08-23 19:58 by jurkat.1640
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 今天放榜吗? +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +4 哈哈蛤? 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[论文投稿] 投稿咨询 +5 wwm09 2026-08-17 7/350 2026-08-21 10:11 by 期刊论文帮手
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
请填处理意见