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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 细胞提取蛋白，做western blotting，怎么知道是提取总蛋白还是膜蛋白呢？
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czcpudai

铜虫 (正式写手)

[求助] 细胞提取蛋白，做western blotting，怎么知道是提取总蛋白还是膜蛋白呢？

各位做过Western blotting的同仁们，本人最近要从细胞中提取蛋白做WB，通过与内参比较，看看药物对细胞内抗氧化蛋白表达量的影响，我想问一下，我提取的蛋白应该是胞内总蛋白呢，还是根据这些抗氧化蛋白在细胞中的位置来选择不同的提取试剂。每种蛋白在细胞内的位置已经找到，有的是在线粒体中，有的是在细胞质中，要是提取的话，该怎么选择试剂呢？由于是第一次接触这种情况，不是很懂，请各位帮助一下！谢谢！
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1楼2013-01-04 22:38:38
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oldflying

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
提取总蛋白就可以了吧，只需要与对照组在抗氧化蛋白相应的位置做比较就可以看出差别。分离不同细胞部位的蛋白质，操作起来难度还是比较大的。
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一个人的努力和坚持！
2楼2013-01-05 08:29:49
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zhang881007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果你想提取不同细胞器中的蛋白，那就离心分离细胞器，如果是总蛋白，就加去垢剂。可溶性蛋白则不用去垢剂！
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shine
3楼2013-01-05 08:38:42
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-06-11 21:20:40
如果你的目的基因定位在特定的细胞器里面，分离细胞器后目的蛋白的相对浓度会提高，对研究它的功能和调控也更方便。但是如果你不知道目的蛋白的定位，先提一个总蛋白做western就可以了。所谓可溶蛋白就是用超速离心后还存在在上清里面。如果是膜蛋白的话会和膜及亚细胞结构一起沉降下来。
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4楼2013-01-05 08:45:42
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-06-11 21:20:50
你先对于你的目的蛋白质加以定位，看是在细胞的什么部位，然后在粉碎细胞时分级分离细胞成分，根据需要留下不同的细胞组分，在进行进一步分离，如果是膜蛋白则要用去垢剂或者表面活性剂，不要一次体总蛋白质，分离起来很麻烦的。
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5楼2013-06-09 21:08:13
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