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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » western目的蛋白发生漂移
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l19z88y22

新虫 (初入文坛)

[求助] western目的蛋白发生漂移

麻烦各位western界的朋友们帮个忙：小弟跑目的蛋白时发生漂移，表现为目的蛋白本来是36KD，而通过标准蛋白分析，该蛋白大概为28KD（然而，我同一批跑的其它蛋白包括Actin却没有这种问题），但我将自己可能出错的地方都纠正了，跑了4次还是一样，崩溃，请大家支支招啦，谢谢！（一抗是SANTA CRUZ的刚刚买来不久，应该没什么问题）
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1楼2013-06-06 22:50:45
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
l19z88y22(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-06-07 01:50:04
SDS-PAGE上蛋白的表观分子量与理论值有差别是正常现象，和蛋白本身的性质有关，不用太在意的。
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2楼2013-06-07 00:33:45
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songzuowei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你这个36KD跑成28KD很正常啊 有时还会变大 那是蛋白糖基化等造成的
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3楼2013-06-07 11:00:56
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l19z88y22

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by songzuowei at 2013-06-07 11:00:56
你这个36KD跑成28KD很正常啊 有时还会变大 那是蛋白糖基化等造成的

你好，我的是蛋白分子量变小了，本来是36KD的，现在是约28KD，我有个博士师兄建议我实在不行将现在的SANTA CRUZ抗体换下，不知SANTA CRUZ抗体是否有时会出现这样不好的现象？
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4楼2013-06-07 16:56:53
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songzuowei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-06-12 22:04:12
引用回帖:
4楼: Originally posted by l19z88y22 at 2013-06-07 16:56:53
你好，我的是蛋白分子量变小了，本来是36KD的，现在是约28KD，我有个博士师兄建议我实在不行将现在的SANTA CRUZ抗体换下，不知SANTA CRUZ抗体是否有时会出现这样不好的现象？...

这个抗体只是与目的蛋白的抗原结合，信号放大指示有没有目的蛋白和目的蛋白的大小，只是个指示作用，蛋白条带大小是跟你的目的蛋白有关，有时候目的蛋白空间结构发生变化或者是糖基化等因素使其在聚丙烯酰胺凝胶里跑快一点或者跑慢一点很正常，我觉得你这个变小了也正常嘛，没事的
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5楼2013-06-07 17:19:03
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l19z88y22

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by songzuowei at 2013-06-07 17:19:03
这个抗体只是与目的蛋白的抗原结合，信号放大指示有没有目的蛋白和目的蛋白的大小，只是个指示作用，蛋白条带大小是跟你的目的蛋白有关，有时候目的蛋白空间结构发生变化或者是糖基化等因素使其在聚丙烯酰胺凝胶里 ...

谢谢，不过我不是完全同意您的看法，抗体也有可能与其它具有类似抗原的蛋白接合，这也是为什么杂带产生的原因。
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6楼2013-06-08 09:58:25
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songzuowei

木虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by l19z88y22 at 2013-06-08 09:58:25
谢谢，不过我不是完全同意您的看法，抗体也有可能与其它具有类似抗原的蛋白接合，这也是为什么杂带产生的原因。...

杂带的产生是由于你的抗体质量本身不好 特异性不强或者封闭没有封闭好 杂带是经常出现，但理论上是不应该出现的
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7楼2013-06-08 13:19:55
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木笑子

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
会不会蛋白降解了呢。
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8楼2013-06-09 09:49:45
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