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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请问有人做过分泌蛋白的Western/Elisa检测么？
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terryzn007

新虫 (初入文坛)

[求助] 请问有人做过分泌蛋白的Western/Elisa检测么？

小弟最近要做Amyloid-β蛋白的检测，但是这个蛋白是经过一系列剪切分泌到细胞外的，也就是培养基里。
我担心直接用培养基做样品去检测会浓度不够。文献里讲的很模糊，请教这里高手有没有什么富集的办法？
或者别的检测Aβ分泌量的方法？
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1楼 2012-08-05 19:46:41
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robert-RBT

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
Western/Elisa检测都很灵敏，应该没有问题。如果实在担心量少，可以用透析袋和PEG先浓缩，再透析浓缩。
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2楼2012-08-05 23:48:50
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terryzn007

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by robert-RBT at 2012-08-05 23:48:50
Western/Elisa检测都很灵敏，应该没有问题。如果实在担心量少，可以用透析袋和PEG先浓缩，再透析浓缩。

虽然这两种方法都很灵敏，但是比方说6孔板的一个孔的细胞用60ulRIPA裂解，得到60ul样品。
但是收集到的培养基有2ml，而且可以认为培养基中总蛋白量应该比细胞内要少，如果不能浓缩到比60ul体系还小，那蛋白浓度就会比细胞裂解样品的少。
没用PEG浓缩果，不知道只用PEG能够浓缩到哪个水平么？
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3楼2012-08-06 13:35:00
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wzysllm

木虫 (小有名气)
我也试过用WB直接跑细胞上清，但都是跑不出来。

后面用Invitrogen公司的Bac-to-Bac系统，制备重组病毒后感染昆虫细胞，蛋白表达后再检测WB就OK了。

现在市面上有小体积的蛋白浓缩管，500ul的体积最后可以浓缩到50ul左右，你可以尝试一下。
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4楼2012-08-07 13:19:40
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terryzn007

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wzysllm at 2012-08-07 13:19:40
我也试过用WB直接跑细胞上清，但都是跑不出来。

后面用Invitrogen公司的Bac-to-Bac系统，制备重组病毒后感染昆虫细胞，蛋白表达后再检测WB就OK了。

现在市面上有小体积的蛋白浓缩管，500ul的体积最后可以浓缩 ...

谢谢，我再看看吧，因为如果要转染的话，估计就要做一个稳定转染的细胞系了，而且前面实验都没用的是没转染过的细胞系。
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5楼2012-08-08 12:37:32
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tianfangze

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你的试剂盒是哪个厂家的呢?
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6楼2013-06-19 22:25:21
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wolfman840

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

试试用小型超滤系统浓缩后检测。不过样品浓度再低，只要你的试剂盒给力就能检测到的。目前我知道的试剂盒，至少可以检测ppm级别的蛋白样品，不过那是检测prA的。
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7楼2013-06-20 10:27:21
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