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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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terryzn007

新虫 (初入文坛)

[求助] 请问有人做过分泌蛋白的Western/Elisa检测么?

小弟最近要做Amyloid-β蛋白的检测,但是这个蛋白是经过一系列剪切分泌到细胞外的,也就是培养基里。
我担心直接用培养基做样品去检测会浓度不够。文献里讲的很模糊,请教这里高手有没有什么富集的办法?
或者别的检测Aβ分泌量的方法?
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robert-RBT

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
Western/Elisa检测都很灵敏,应该没有问题。如果实在担心量少,可以用透析袋和PEG先浓缩,再透析浓缩。
2楼2012-08-05 23:48:50
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terryzn007

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by robert-RBT at 2012-08-05 23:48:50
Western/Elisa检测都很灵敏,应该没有问题。如果实在担心量少,可以用透析袋和PEG先浓缩,再透析浓缩。

虽然这两种方法都很灵敏,但是比方说6孔板的一个孔的细胞用60ulRIPA裂解,得到60ul样品。
但是收集到的培养基有2ml,而且可以认为培养基中总蛋白量应该比细胞内要少,如果不能浓缩到比60ul体系还小,那蛋白浓度就会比细胞裂解样品的少。
没用PEG浓缩果,不知道只用PEG能够浓缩到哪个水平么?
3楼2012-08-06 13:35:00
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wzysllm

木虫 (小有名气)

我也试过用WB直接跑细胞上清,但都是跑不出来。

后面用Invitrogen公司的Bac-to-Bac系统,制备重组病毒后感染昆虫细胞,蛋白表达后再检测WB就OK了。

现在市面上有小体积的蛋白浓缩管,500ul的体积最后可以浓缩到50ul左右,你可以尝试一下。
4楼2012-08-07 13:19:40
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terryzn007

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by wzysllm at 2012-08-07 13:19:40
我也试过用WB直接跑细胞上清,但都是跑不出来。

后面用Invitrogen公司的Bac-to-Bac系统,制备重组病毒后感染昆虫细胞,蛋白表达后再检测WB就OK了。

现在市面上有小体积的蛋白浓缩管,500ul的体积最后可以浓缩 ...

谢谢,我再看看吧,因为如果要转染的话,估计就要做一个稳定转染的细胞系了,而且前面实验都没用的是没转染过的细胞系。
5楼2012-08-08 12:37:32
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tianfangze

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你的试剂盒是哪个厂家的呢?
6楼2013-06-19 22:25:21
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wolfman840

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

试试用小型超滤系统浓缩后检测。不过样品浓度再低,只要你的试剂盒给力就能检测到的。目前我知道的试剂盒,至少可以检测ppm级别的蛋白样品,不过那是检测prA的。
7楼2013-06-20 10:27:21
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