应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请问有人做过分泌蛋白的Western/Elisa检测么？
51/1返回列表
查看: 2108  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

terryzn007

新虫 (初入文坛)

[求助] 请问有人做过分泌蛋白的Western/Elisa检测么？

小弟最近要做Amyloid-β蛋白的检测，但是这个蛋白是经过一系列剪切分泌到细胞外的，也就是培养基里。
我担心直接用培养基做样品去检测会浓度不够。文献里讲的很模糊，请教这里高手有没有什么富集的办法？
或者别的检测Aβ分泌量的方法？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

Biological

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-08-05 19:46:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wolfman840

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

试试用小型超滤系统浓缩后检测。不过样品浓度再低，只要你的试剂盒给力就能检测到的。目前我知道的试剂盒，至少可以检测ppm级别的蛋白样品，不过那是检测prA的。
赞一下 回复此楼
7楼2013-06-20 10:27:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

robert-RBT

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
Western/Elisa检测都很灵敏，应该没有问题。如果实在担心量少，可以用透析袋和PEG先浓缩，再透析浓缩。
赞一下 回复此楼
2楼2012-08-05 23:48:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

terryzn007

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by robert-RBT at 2012-08-05 23:48:50
Western/Elisa检测都很灵敏，应该没有问题。如果实在担心量少，可以用透析袋和PEG先浓缩，再透析浓缩。

虽然这两种方法都很灵敏，但是比方说6孔板的一个孔的细胞用60ulRIPA裂解，得到60ul样品。
但是收集到的培养基有2ml，而且可以认为培养基中总蛋白量应该比细胞内要少，如果不能浓缩到比60ul体系还小，那蛋白浓度就会比细胞裂解样品的少。
没用PEG浓缩果，不知道只用PEG能够浓缩到哪个水平么？
赞一下 回复此楼
3楼2012-08-06 13:35:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wzysllm

木虫 (小有名气)
我也试过用WB直接跑细胞上清，但都是跑不出来。

后面用Invitrogen公司的Bac-to-Bac系统，制备重组病毒后感染昆虫细胞，蛋白表达后再检测WB就OK了。

现在市面上有小体积的蛋白浓缩管，500ul的体积最后可以浓缩到50ul左右，你可以尝试一下。
赞一下 回复此楼
4楼2012-08-07 13:19:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭