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l19z88y22

新虫 (初入文坛)

[求助] western目的蛋白发生漂移

麻烦各位western界的朋友们帮个忙:小弟跑目的蛋白时发生漂移,表现为目的蛋白本来是36KD,而通过标准蛋白分析,该蛋白大概为28KD(然而,我同一批跑的其它蛋白包括Actin却没有这种问题),但我将自己可能出错的地方都纠正了,跑了4次还是一样,崩溃,请大家支支招啦,谢谢!(一抗是SANTA CRUZ的刚刚买来不久,应该没什么问题)
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songzuowei

木虫 (著名写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by l19z88y22 at 2013-06-08 09:58:25
谢谢,不过我不是完全同意您的看法,抗体也有可能与其它具有类似抗原的蛋白接合,这也是为什么杂带产生的原因。...

杂带的产生是由于你的抗体质量本身不好 特异性不强或者封闭没有封闭好 杂带是经常出现,但理论上是不应该出现的
7楼2013-06-08 13:19:55
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查看全部 8 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
l19z88y22(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-06-07 01:50:04
SDS-PAGE上蛋白的表观分子量与理论值有差别是正常现象,和蛋白本身的性质有关,不用太在意的。
2楼2013-06-07 00:33:45
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songzuowei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你这个36KD跑成28KD很正常啊 有时还会变大 那是蛋白糖基化等造成的
3楼2013-06-07 11:00:56
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l19z88y22

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by songzuowei at 2013-06-07 11:00:56
你这个36KD跑成28KD很正常啊 有时还会变大 那是蛋白糖基化等造成的

你好,我的是蛋白分子量变小了,本来是36KD的,现在是约28KD,我有个博士师兄建议我实在不行将现在的SANTA CRUZ抗体换下,不知SANTA CRUZ抗体是否有时会出现这样不好的现象?
4楼2013-06-07 16:56:53
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