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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 医学 » 基础 » 【求助】western结果条带位置不对，是何原因？
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忍者鸣人

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] 【求助】western结果条带位置不对，是何原因？已有5人参与

请教大家：
我做的western，有条带，但是分子量不对，比一抗说明书上面说的分子量低了50KD，请问什么原因？谢谢大家。多多帮帮啊！！
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1楼2010-10-26 22:00:51
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tigertang

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
建议加阳性/阴性对照， 可能是非特异的带
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2楼2010-10-26 23:59:23
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忍者鸣人

铁杆木虫 (正式写手)
请大家帮帮忙 这个问题很困扰我啊！
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3楼2010-10-27 18:49:50
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happychou

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
如果是只是和目的条带差一点点，考虑是抗原漂移。如果像楼主所说的那样，差50多，我就深刻的质疑你的抗体特异性了？另外，我想问下楼主转完膜后有没有剪膜啊？是不是嫌抗体很多，呵呵
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4楼2010-10-28 22:54:51
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忍者鸣人

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by happychou at 2010-10-28 22:54:51:
如果是只是和目的条带差一点点，考虑是抗原漂移。如果像楼主所说的那样，差50多，我就深刻的质疑你的抗体特异性了？另外，我想问下楼主转完膜后有没有剪膜啊？是不是嫌抗体很多，呵呵

哈哈 剪膜了啊 说明书上写的是130kd 我做出来的80多 唉郁闷 不懂你说的漂移啥意思
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5楼2010-10-28 23:06:16
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宁夏8083

铁杆木虫 (正式写手)
★
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我也觉得奇怪？剪膜后还会有小于目的蛋白50KD的条带？还有一种可能，就是像抗体的SDS-PAGE电泳一样，是55和25两条带，与空间结果有关，但是你的抗体是有特异性的啊，怎么会识别精度那么差？
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6楼2011-01-09 23:30:08
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忍者鸣人

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 忍者鸣人 at 2010-10-28 23:06:16:

哈哈 剪膜了啊 说明书上写的是130kd 我做出来的80多 唉郁闷 不懂你说的漂移啥意思

这个问题 不是我一个人遇到了 我在丁香园里咨询这个问题 遇到类似问题的战友至少有三个了。
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7楼2011-01-10 09:56:35
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虫儿小

铜虫 (小有名气)
★
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有可能在做的过程中蛋白质发生变性，可能是在处理样品的过程，例如本来100多KD的分子发生降解，生成了小分子量的，同样一抗还是能识别出来。建议在处理样品时加上蛋白酶抑制剂，仅供参考
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8楼2011-01-10 14:45:47
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