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忍者鸣人

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] 【求助】western结果条带位置不对,是何原因? 已有5人参与

请教大家:
我做的western,有条带,但是分子量不对,比一抗说明书上面说的分子量低了50KD,请问什么原因?谢谢大家。多多帮帮啊!!
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tigertang

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
建议加阳性/阴性对照, 可能是非特异的带
2楼2010-10-26 23:59:23
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忍者鸣人

铁杆木虫 (正式写手)

请大家帮帮忙 这个问题很困扰我啊!
3楼2010-10-27 18:49:50
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happychou

新虫 (初入文坛)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
如果是只是和目的条带差一点点,考虑是抗原漂移。如果像楼主所说的那样,差50多,我就深刻的质疑你的抗体特异性了?另外,我想问下楼主转完膜后有没有剪膜啊?是不是嫌抗体很多,呵呵
4楼2010-10-28 22:54:51
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忍者鸣人

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by happychou at 2010-10-28 22:54:51:
如果是只是和目的条带差一点点,考虑是抗原漂移。如果像楼主所说的那样,差50多,我就深刻的质疑你的抗体特异性了?另外,我想问下楼主转完膜后有没有剪膜啊?是不是嫌抗体很多,呵呵

哈哈 剪膜了啊 说明书上写的是130kd 我做出来的80多 唉郁闷 不懂你说的漂移啥意思
5楼2010-10-28 23:06:16
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宁夏8083

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我也觉得奇怪?剪膜后还会有小于目的蛋白50KD的条带?还有一种可能,就是像抗体的SDS-PAGE电泳一样,是55和25两条带,与空间结果有关,但是你的抗体是有特异性的啊,怎么会识别精度那么差?
6楼2011-01-09 23:30:08
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忍者鸣人

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 忍者鸣人 at 2010-10-28 23:06:16:

哈哈 剪膜了啊 说明书上写的是130kd 我做出来的80多 唉郁闷 不懂你说的漂移啥意思

这个问题 不是我一个人遇到了 我在丁香园里咨询这个问题 遇到类似问题的战友至少有三个了。
7楼2011-01-10 09:56:35
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虫儿小

铜虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
有可能在做的过程中蛋白质发生变性,可能是在处理样品的过程,例如本来100多KD的分子发生降解,生成了小分子量的,同样一抗还是能识别出来。建议在处理样品时加上蛋白酶抑制剂,仅供参考
8楼2011-01-10 14:45:47
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