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七叶禾0916

新虫 (初入文坛)

[求助] western 转膜不均匀什么原因

最近转膜marker总是转不全。我的两个目的蛋白大小分别是110kd、33kd，以前转膜条件是100V转90min，完全能转过去，最近不知什么原因转2.5h还有部分marker在胶上，今天上了两孔marker，一孔全部转到膜上，另一孔只转了一半，请高手指教
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1楼 2012-10-26 21:42:23
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七叶禾0916

新虫 (初入文坛)
忘了讲，是湿转
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2楼2012-10-26 21:48:53
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英菲尼迪

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个可能是两个marker加的不一样 比如是均匀否 这种实验就得多做 做的多了就经验足了
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3楼2012-10-26 22:14:23
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piaoyingaza

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-29 16:05:14
湿转影响因素很多，Transfer buffer很关键，配方一定不能出错，温度控制必须搞好，最好是在四度环境下，用碎冰盖得严严实实的，一般来说，110kd的蛋白，100V，1h足矣，再做吧
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4楼2012-10-29 09:02:26
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jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-29 16:05:23
Western的操作比较繁琐，从配制各种溶液到跑胶转膜，出现问题之后可能的影响因素很多，比较难分析，所以从配制溶液开始，每一步都要自己亲自操作，这样容易分析问题的原因
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5楼2012-10-29 14:49:17
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
Transfer buffer是新配的吗？是不是用的次数太多了？
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jiayoubashaonian
6楼2012-10-29 15:51:44
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孙启亮

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

可能是因为你的三明治夹层有气泡，造成局部电阻过大所以没转过去
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7楼2013-01-03 14:24:59
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porphybaby

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

可能是 三明治 没夹好 松了 然后你的蛋白都飘散到转膜液里去了 如果是这样 你可以用 考马斯亮蓝去染一下转膜后的胶 看看是否一边几乎没有条带 而另一边仍然有较多的条带

你是不是确定 你的样品 跟 marker 的现象一样，就是 一边转到了，一边没转上？
如果是左右两边marker不一样 也有可能是 marker的量不一样 导致一边全上去 另一边 还有一些在

这个可能是你上样上不准的原因。
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8楼2013-01-04 14:02:13
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