| 查看: 3711 | 回复: 12 | ||
15895241331铁虫 (正式写手)
|
[求助]
小分子蛋白的western blotting注意事项
|
|
| 本人要跑11到17kD的蛋白质，做了两次无结果，分离胶15%，电泳100V 1.5h，转膜350mA 45min， 封闭1h。求高搜指点一二！ |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有86人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 细胞提取蛋白，做western blotting，怎么知道是提取总蛋白还是膜蛋白呢？
已经有4人回复
- 104KD的蛋白，做western blot电泳和转膜时间及膜的选择？
已经有21人回复
- 请问20多kD的蛋白做Western可不可以用湿转？另外需要注意些什么？
已经有20人回复
- western 中，目的蛋白没有，但是Marker 暴出来了，什么原因啊
已经有16人回复
- 求助：western blotting一抗有关问题
已经有10人回复
- western blot中蛋白质转印问题
已经有17人回复
- 关于western blotting MARKER 的问题
已经有12人回复
- western-blotting 为什么老是不能显色？
已经有13人回复
- 请教western blot 时蛋白稀释液情况
已经有4人回复
- 纯化后的蛋白做western，出现很明显的两条带，请问是二聚体吗？怎么打开成单体？
已经有11人回复
- 【分享】新手上路 Western blot问题集合
已经有6人回复
- 【求助/交流】请教大分子量蛋白western blot转膜的一些问题
已经有10人回复
- 【求助/交流】求一个western blotting一抗二抗孵育的好方法？
已经有9人回复
- 【求助/交流】极小分子与极大分子蛋白的Western Bloting转膜求助！
已经有10人回复
- 【求助】western blotting蛋白条带
已经有3人回复
8楼2013-06-08 11:33:57
kx444555
至尊木虫 (正式写手)
- 应助: 56 (初中生)
- 贵宾: 1.326
- 金币: 10554.2
- 散金: 288
- 红花: 12
- 帖子: 820
- 在线: 238小时
- 虫号: 999718
- 注册: 2010-04-18
- 性别: GG
- 专业: 植物遗传学
2楼2013-06-06 15:18:01
songzuowei
木虫 (著名写手)
- 应助: 88 (初中生)
- 金币: 2666.2
- 散金: 18
- 红花: 7
- 帖子: 2058
- 在线: 98.5小时
- 虫号: 2469387
- 注册: 2013-05-17
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
【答案】应助回帖
★
感谢参与，应助指数 +1
15895241331(myprayer代发): 金币+1, Send person rose fragrance in hand, thank you loosen one's purse strings generously, look forward to your wonderful 2013-06-07 08:52:29
感谢参与，应助指数 +1
15895241331(myprayer代发): 金币+1, Send person rose fragrance in hand, thank you loosen one's purse strings generously, look forward to your wonderful 2013-06-07 08:52:29
| 我认为一你的封闭时间太短，37°至少两小时，二 转膜时间太长，这么小的蛋白，半干转15min就足够了 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
158952413313楼2013-06-06 16:39:57
15895241331
铁虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 714.5
- 散金: 531
- 红花: 15
- 帖子: 705
- 在线: 141.6小时
- 虫号: 1228360
- 注册: 2011-03-10
- 专业: 细胞信号转导
4楼2013-06-07 12:14:04
songzuowei
木虫 (著名写手)
- 应助: 88 (初中生)
- 金币: 2666.2
- 散金: 18
- 红花: 7
- 帖子: 2058
- 在线: 98.5小时
- 虫号: 2469387
- 注册: 2013-05-17
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
|
我没有提过组蛋白唉 封闭不是跟蛋白大小相关的，封闭的目的是将膜上的非特异性位点封闭掉，免得一抗与非特异性蛋白结合，出现杂带，或者是背景太深，所以封闭时间不要太短，太长了也不好，湿转的话我不是很清楚哎 但是这么小的蛋白应该很好转的 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
5楼2013-06-07 12:31:31
15895241331
铁虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 714.5
- 散金: 531
- 红花: 15
- 帖子: 705
- 在线: 141.6小时
- 虫号: 1228360
- 注册: 2011-03-10
- 专业: 细胞信号转导
6楼2013-06-07 14:28:38
songzuowei
木虫 (著名写手)
 |
7楼2013-06-07 15:06:11
★
myprayer: 金币+1, 回答很好，perfect 2013-07-11 19:20:50
myprayer: 金币+1, 回答很好，perfect 2013-07-11 19:20:50
|
本帖内容被屏蔽 |
9楼2013-06-17 08:35:34
15895241331
铁虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 714.5
- 散金: 531
- 红花: 15
- 帖子: 705
- 在线: 141.6小时
- 虫号: 1228360
- 注册: 2011-03-10
- 专业: 细胞信号转导
10楼2013-07-11 18:26:18
