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15895241331铁虫 (正式写手)
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小分子蛋白的western blotting注意事项
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| 本人要跑11到17kD的蛋白质，做了两次无结果，分离胶15%，电泳100V 1.5h，转膜350mA 45min， 封闭1h。求高搜指点一二！ |
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8楼2013-06-08 11:33:57
kx444555
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2楼2013-06-06 15:18:01
songzuowei
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| 我认为一你的封闭时间太短，37°至少两小时，二 转膜时间太长，这么小的蛋白，半干转15min就足够了 |
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158952413313楼2013-06-06 16:39:57
15895241331
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4楼2013-06-07 12:14:04
songzuowei
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我没有提过组蛋白唉 封闭不是跟蛋白大小相关的，封闭的目的是将膜上的非特异性位点封闭掉，免得一抗与非特异性蛋白结合，出现杂带，或者是背景太深，所以封闭时间不要太短，太长了也不好，湿转的话我不是很清楚哎 但是这么小的蛋白应该很好转的 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
5楼2013-06-07 12:31:31
15895241331
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6楼2013-06-07 14:28:38
songzuowei
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7楼2013-06-07 15:06:11
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myprayer: 金币+1, 回答很好，perfect 2013-07-11 19:20:50
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9楼2013-06-17 08:35:34
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10楼2013-07-11 18:26:18
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