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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 小分子蛋白的western blotting注意事项
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15895241331

铁虫 (正式写手)

[求助] 小分子蛋白的western blotting注意事项

本人要跑11到17kD的蛋白质，做了两次无结果，分离胶15%，电泳100V 1.5h，转膜350mA 45min， 封闭1h。求高搜指点一二！
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1楼2013-06-06 14:08:29
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songzuowei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
15895241331(myprayer代发): 金币+1, Send person rose fragrance in hand, thank you loosen one's purse strings generously, look forward to your wonderful 2013-06-07 08:52:29
我认为一你的封闭时间太短，37°至少两小时，二 转膜时间太长，这么小的蛋白，半干转15min就足够了
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15895241331
3楼2013-06-06 16:39:57
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kx444555

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
15895241331(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-06-07 08:52:17
建议做梯度胶跑SDS-PAGE，比如4%-20%
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星陈代谢
2楼2013-06-06 15:18:01
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15895241331

铁虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by songzuowei at 2013-06-06 16:39:57
我认为一你的封闭时间太短，37°至少两小时，二 转膜时间太长，这么小的蛋白，半干转15min就足够了

我们做的是组蛋白，在提取蛋白样品的时候有木有什么特别的注意事项？，这个小蛋白需要封闭这么长时间吗？我们转膜用的是湿转
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4楼2013-06-07 12:14:04
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songzuowei

木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 15895241331 at 2013-06-07 12:14:04
我们做的是组蛋白，在提取蛋白样品的时候有木有什么特别的注意事项？，这个小蛋白需要封闭这么长时间吗？我们转膜用的是湿转...

我没有提过组蛋白唉 封闭不是跟蛋白大小相关的，封闭的目的是将膜上的非特异性位点封闭掉，免得一抗与非特异性蛋白结合，出现杂带，或者是背景太深，所以封闭时间不要太短，太长了也不好，湿转的话我不是很清楚哎 但是这么小的蛋白应该很好转的
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15895241331
5楼2013-06-07 12:31:31
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