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15895241331铁虫 (正式写手)
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[求助]
小分子蛋白的western blotting注意事项
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| 本人要跑11到17kD的蛋白质，做了两次无结果，分离胶15%，电泳100V 1.5h，转膜350mA 45min， 封闭1h。求高搜指点一二！ |
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songzuowei
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【答案】应助回帖
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15895241331(myprayer代发): 金币+1, Send person rose fragrance in hand, thank you loosen one's purse strings generously, look forward to your wonderful 2013-06-07 08:52:29
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| 我认为一你的封闭时间太短，37°至少两小时，二 转膜时间太长，这么小的蛋白，半干转15min就足够了 |
158952413313楼2013-06-06 16:39:57
kx444555
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4楼2013-06-07 12:14:04
songzuowei
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我没有提过组蛋白唉 封闭不是跟蛋白大小相关的，封闭的目的是将膜上的非特异性位点封闭掉，免得一抗与非特异性蛋白结合，出现杂带，或者是背景太深，所以封闭时间不要太短，太长了也不好，湿转的话我不是很清楚哎 但是这么小的蛋白应该很好转的 |
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5楼2013-06-07 12:31:31
