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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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喵汪

银虫 (小有名气)

[求助] 求助:western blotting一抗有关问题

做western blot时要先用一抗,再用HRP标记的二抗,
为什么不能直接用HRP标记的一抗呢?
还有,我试过了,先用金标一抗,再用HRP标记的二抗也做不出来,为什么一抗改成金标一抗就不行了呢?
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喵汪

银虫 (小有名气)

有木有人回?
2楼2012-06-21 18:26:14
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Alisa_lin

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
一抗用于识别你的目的蛋白,二抗识别一抗
3楼2012-06-22 09:13:32
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Alisa_lin

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by Alisa_lin at 2012-06-22 09:13:32
一抗用于识别你的目的蛋白,二抗识别一抗

二抗和一抗结合,并带有可以被检测出的标记(如带荧光、放射性、化学发光或显色基团),作用是检测一抗。  标记的是二抗吧
4楼2012-06-22 09:20:22
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喵汪

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by Alisa_lin at 2012-06-22 09:13:32
一抗用于识别你的目的蛋白,二抗识别一抗

为什么不能直接用HRP标记的一抗呢?先用金标一抗,再用HRP标记的二抗为什么也做不出来?
5楼2012-06-22 21:06:25
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freerain

禁虫 (职业作家)

感谢参与,应助指数 +1
本帖内容被屏蔽

6楼2012-06-23 05:42:02
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mlanqiang

木虫之王 (文学泰斗)

蓝博士

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
直接标一抗信号不够,检测不到信号,二抗有协同放大功能。
蓝精灵
7楼2012-06-23 06:02:56
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yyk81

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
善于思考的人!赞一个。现在很多western 都开始只用一抗了,HRP直接标一抗,效果还可以,也可以通过生物素标记放大信号。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
学无止境!
8楼2012-06-23 06:36:32
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sayaya

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不是不能直接用HRP标记一抗,如果要这么做,是完全可以的。
WB本身就分直接法,间接法等,所谓直接法就是直接标记一抗,但实践中更多采用标记二抗的间接法。
之所以,一般都采用标记二抗的方法,原因有两个:
1,若果你的一抗种类比较多,那就得一个一个地标记,很麻烦不是?
2,直接标记一抗,只能结合少量标记物,而标记二抗以后,一抗可以结合不止一个二抗分子,所以可以通过二抗来增强信号,使WB结果更清晰。
9楼2012-06-23 10:46:33
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喵汪

银虫 (小有名气)

谢谢各位的回复,明白了。
可是还是想不通为什么金标的一抗做不出来?
10楼2012-06-23 13:53:26
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