应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】有关western blotting的求救
101/1返回列表
查看: 2753  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

liwen410

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】有关western blotting的求救 已有7人参与

本人是一个新手，最近两个月都在做western blotting检测目的蛋白的表达。但是结果不理想。因为目的蛋白表达得很少，显影显不出来，显色更显不出来。有一次显出来，但接着又重复不出来。即便显出来，那个条带也是隐隐约约的，因为背景太强了。找了很多原因，包括：增加蛋白上样量，膜多洗几次，等等。效果都不理想。实在不知道问题出在哪里。有时觉得是不是自己真的不适合做科研呢？
在下虚心向各位高手请教，万分感谢。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2009-12-15 20:41:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
有时候是你的蛋白特别难做而已……或者抗体不大好
在做什么蛋白呢？用的哪个公司的抗体。说不定论坛里有人做过可以给你建议
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2009-12-15 20:57:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liwen410

新虫 (初入文坛)
先谢谢三磷酸腺苷了，我也不知道是我的蛋白难做，还是技术不到家。
赞一下 回复此楼
3楼2009-12-15 21:15:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

程涛

至尊木虫 (著名写手)
多做几次就行了
回复此楼
4楼2010-04-10 19:20:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liyingye001

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我也出现同样的问题，求高手指教
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-03-20 17:54:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lavender169

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
首先  抗体很重要  你要做的目标蛋白和抗体的来源一定不能是同一种 否则就会出现你说的这种  隐约能看到目标蛋白  但是背景估计比你的目标蛋白还清晰 而且相当的杂乱
赞一下(1人) 回复此楼
::::::::::::::::jusmine:::::::::::::::
6楼2011-03-29 14:01:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

terry130

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
除了抗体的问题外，有些丰度很低的蛋白就是这个样子的，很难做。一抗浓一些，1:100-1:500. 4度ON，二抗无所谓。洗膜时间长一些，可以十分钟一次，洗六次。这样最大限度降低背景。之后曝光两个小时。这样还没有带的话就考虑换抗体吧~~~~

另外，如果你的lysate是全细胞的话，上样量尽可能大一些，30ug总蛋白/lane 试试。
赞一下(1人) 回复此楼
摒气动方息，宁神心自明。
7楼2011-03-29 14:53:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lixinna2009

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
如果是弱的带可以增加蛋白上样量，在没有就应该是你抗体的原因，而且一般背景都不会太深，要是太深说明抗体质量不好
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2011-03-30 10:51:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luohuacheng

新虫 (小有名气)
有些东西需要摸索，不同的实验室，同样的protocol，做的过程是需要稍加改变的。再摸索一下吧
赞一下 回复此楼
9楼2011-04-27 22:34:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dancy19

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
背景太暗的话可以将BLOCKING的时间延长些，我们一般都block过夜
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2011-04-29 14:45:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 liwen410 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 2rKfVQg2jQww 2026-11-06 5/250 2026-11-07 17:23 by Xc2FxHsHkBNc
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 5/250 2026-11-07 17:01 by Xc2FxHsHkBNc
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 4/200 2026-11-07 16:28 by Xc2FxHsHkBNc
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 5/250 2026-11-07 16:06 by Xc2FxHsHkBNc
[教师之家] 延安大学回应“副教授留绝笔信”：确已离世，正核实举报内容 +3 yexuqing 2026-11-04 5/250 2026-11-07 13:22 by 苏东坡二世
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +10 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 22/1100 2026-11-06 17:18 by 5sJFDKp2kwuI
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 7/350 2026-11-06 16:43 by 5sJFDKp2kwuI
[考博] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +6 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 8/400 2026-11-06 16:34 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 11/550 2026-11-06 16:32 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:12 by 5sJFDKp2kwuI
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 11/550 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +7 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 14/700 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 10/500 2026-11-06 12:32 by BkA9Bi5cMhkD
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 5/250 2026-11-06 09:01 by 2lRNluKrJpwL
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 12/600 2026-11-06 05:32 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:11 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 kvewwGtKktqB 2026-11-04 16/800 2026-11-06 05:00 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:15 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 10/500 2026-11-06 01:51 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:42 by qL1cU46YIdK0
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭