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晴天1882

木虫 (正式写手)


[交流] 【求助/交流】一抗稀释问题

做western bloting实验,如果一抗用水稀释了,会有什么后果?
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qjy_134

铜虫 (小有名气)


用封闭液稀释
2楼2011-03-26 09:30:58
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lstt09nk(金币+1): 感谢参与 2011-03-27 13:09:23
抗体很容易降解
你补点高浓度的TBST进去吧
3楼2011-03-26 09:33:22
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terry130

木虫 (正式写手)


★ ★ ★
lstt09nk(金币+3): 说的很不错哦~~ 2011-03-27 13:08:38
引用回帖:
Originally posted by 晴天1882 at 2011-03-25 20:15:42:
做western bloting实验,如果一抗用水稀释了,会有什么后果?

用水稀释肯定影响抗体与蛋白的结合。你block用什么溶液,就用它稀释抗体。一般都是用5% fat free milk,有钱的话可以用1%BSA,这些都是溶在PBS-T 或者TBS-T中的。其实单用PBS-T去稀释1抗的效果也不错,对于一些痕量蛋白的检测这种方式也许会更好,但是后续洗膜的时间和强度都要加大,否则背景容易过高。
4楼2011-03-26 09:45:56
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lstt09nk(金币+1): 鼓励交流,欢迎常来 2011-03-27 13:09:07
马上按浓度补上高浓度的TBST到正常
5楼2011-03-26 10:51:43
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晴天1882

木虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by jhu132llh at 2011-03-26 10:51:43:
马上按浓度补上高浓度的TBST到正常

如果已经过了一个星期怎么办?
6楼2011-03-26 19:53:04
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terry130

木虫 (正式写手)


★ ★
lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-03-27 14:54:44
引用回帖:
Originally posted by 晴天1882 at 2011-03-26 19:53:04:
如果已经过了一个星期怎么办?

重新配就是了,何必去担心这个呢?做一个western的用量也就几微升,不要省这个了~~这样考虑问题到最后往往会浪费更多的钱的。
7楼2011-03-27 14:51:45
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晴天1882

木虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by terry130 at 2011-03-27 14:51:45:
重新配就是了,何必去担心这个呢?做一个western的用量也就几微升,不要省这个了~~这样考虑问题到最后往往会浪费更多的钱的。

是老师花钱买的啊!
8楼2011-03-27 23:06:00
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影响不大
9楼2011-03-28 18:41:50
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南江之木

铜虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
请问做免疫组化的血清封闭液用0.01M的PBS还是0.1M的PBS?谢谢
10楼2012-07-16 22:08:24
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