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晴天1882

木虫 (正式写手)

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[交流] 【求助/交流】一抗稀释问题

做western bloting实验，如果一抗用水稀释了，会有什么后果？

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1楼 2011-03-25 20:15:42

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qjy_134

铜虫 (小有名气)

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用封闭液稀释

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2楼2011-03-26 09:30:58

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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★
lstt09nk(金币+1): 感谢参与 2011-03-27 13:09:23

抗体很容易降解
你补点高浓度的TBST进去吧

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3楼2011-03-26 09:33:22

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terry130

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
lstt09nk(金币+3): 说的很不错哦~~ 2011-03-27 13:08:38

引用回帖:

Originally posted by 晴天1882 at 2011-03-25 20:15:42:
做western bloting实验，如果一抗用水稀释了，会有什么后果？

用水稀释肯定影响抗体与蛋白的结合。你block用什么溶液，就用它稀释抗体。一般都是用5% fat free milk，有钱的话可以用1%BSA，这些都是溶在PBS-T 或者TBS-T中的。其实单用PBS-T去稀释1抗的效果也不错，对于一些痕量蛋白的检测这种方式也许会更好，但是后续洗膜的时间和强度都要加大，否则背景容易过高。

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4楼2011-03-26 09:45:56

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