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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助/交流】一抗稀释问题
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晴天1882

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】一抗稀释问题

做western bloting实验，如果一抗用水稀释了，会有什么后果？
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1楼 2011-03-25 20:15:42
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terry130

木虫 (正式写手)
★ ★
lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-03-27 14:54:44
引用回帖:
Originally posted by 晴天1882 at 2011-03-26 19:53:04:
如果已经过了一个星期怎么办？

重新配就是了，何必去担心这个呢？做一个western的用量也就几微升，不要省这个了~~这样考虑问题到最后往往会浪费更多的钱的。
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7楼2011-03-27 14:51:45
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
lstt09nk(金币+1): 感谢参与 2011-03-27 13:09:23
抗体很容易降解
你补点高浓度的TBST进去吧
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3楼2011-03-26 09:33:22
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terry130

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
lstt09nk(金币+3): 说的很不错哦~~ 2011-03-27 13:08:38
引用回帖:
Originally posted by 晴天1882 at 2011-03-25 20:15:42:
做western bloting实验，如果一抗用水稀释了，会有什么后果？

用水稀释肯定影响抗体与蛋白的结合。你block用什么溶液，就用它稀释抗体。一般都是用5% fat free milk，有钱的话可以用1%BSA，这些都是溶在PBS-T 或者TBS-T中的。其实单用PBS-T去稀释1抗的效果也不错，对于一些痕量蛋白的检测这种方式也许会更好，但是后续洗膜的时间和强度都要加大，否则背景容易过高。
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4楼2011-03-26 09:45:56
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jhu132llh

荣誉版主 (知名作家)
★
lstt09nk(金币+1): 鼓励交流，欢迎常来 2011-03-27 13:09:07
马上按浓度补上高浓度的TBST到正常
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5楼2011-03-26 10:51:43
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