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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 一抗孵育时间
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水水726

新虫 (小有名气)

[求助] 一抗孵育时间

一抗在室温摇了4小时后，放4度过夜，条带还是很浅。。。一抗稀释倍数为1：500，上样量100多ug，请问是不是室温放时间太长一抗失效了啊？？
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1楼 2011-06-17 15:03:24
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biowangkun

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
lstt09nk(金币+2): 感谢交流 2011-06-18 23:15:25
应该不是一抗失效，虽然一般要求一抗室温1-2小时，但是我觉得问题可能是一抗不好，也有可能是你的条带本身不够明显。你加个positive control lane就行了。如果control lane也浅应该就是一抗的问题，如果control很深，那么应该是你自己sample的问题了。
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2楼2011-06-18 12:22:11
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qdwmq

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-06-18 23:15:36
我们实验室一般是37度1小时，或者4度过夜。
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3楼2011-06-18 21:44:38
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jsk10

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
silicare(金币+3): 2011-06-20 08:22:43
引用回帖:
Originally posted by 水水726 at 2011-06-17 15:03:24:
一抗在室温摇了4小时后，放4度过夜，条带还是很浅。。。一抗稀释倍数为1：500，上样量100多ug，请问是不是室温放时间太长一抗失效了啊？？

抗体是蛋白质，即使在室温放置一天也不会失去活性的，因此，为了排除一抗的问题，设置对照条带，看情况怎么样，排除一抗问题后，就是孵育时间的问题，抗原、抗体的结合是很快的，因此孵育时间不必太长，室温一小时足矣。如果不是一抗问题，那么可能是样品或二抗的问题，因此要经过对照试验才能验证以上问题。
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互相帮助！
4楼2011-06-19 22:53:18
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水水726

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by qdwmq at 2011-06-18 21:44:38:
我们实验室一般是37度1小时，或者4度过夜。

直接放4度过夜可以么？不用室温摇的么？
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5楼2011-06-20 09:55:27
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睡着数绵羊

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
lstt09nk(金币+2): 鼓励交流，欢迎常来 2011-06-20 13:13:17
水水726(金币+5): 2011-06-21 21:14:03
1.做个参照好找出原因，
2.就是测蛋白浓度，现在的试剂盒也只能测个大概，误差很大的，要确定下测量值有没有问题，是不是蛋白量少了。
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6楼2011-06-20 09:59:08
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qdwmq

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

水水726(金币+5): 2011-06-21 21:13:55
引用回帖:
Originally posted by 水水726 at 2011-06-20 09:55:27:
直接放4度过夜可以么？不用室温摇的么？

我们都不摇 效果也挺好的
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7楼2011-06-20 13:15:15
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