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水水726

新虫 (小有名气)

[求助] 一抗孵育时间

一抗在室温摇了4小时后,放4度过夜,条带还是很浅。。。一抗稀释倍数为1:500,上样量100多ug,请问是不是室温放时间太长一抗失效了啊??
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biowangkun

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
lstt09nk(金币+2): 感谢交流 2011-06-18 23:15:25
应该不是一抗失效,虽然一般要求一抗室温1-2小时,但是我觉得问题可能是一抗不好,也有可能是你的条带本身不够明显。你加个positive control lane就行了。如果control lane也浅应该就是一抗的问题,如果control很深,那么应该是你自己sample的问题了。
2楼2011-06-18 12:22:11
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qdwmq

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-06-18 23:15:36
我们实验室一般是37度1小时,或者4度过夜。
3楼2011-06-18 21:44:38
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jsk10

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
silicare(金币+3): 2011-06-20 08:22:43
引用回帖:
Originally posted by 水水726 at 2011-06-17 15:03:24:
一抗在室温摇了4小时后,放4度过夜,条带还是很浅。。。一抗稀释倍数为1:500,上样量100多ug,请问是不是室温放时间太长一抗失效了啊??

抗体是蛋白质,即使在室温放置一天也不会失去活性的,因此,为了排除一抗的问题,设置对照条带,看情况怎么样,排除一抗问题后,就是孵育时间的问题,抗原、抗体的结合是很快的,因此孵育时间不必太长,室温一小时足矣。如果不是一抗问题,那么可能是样品或二抗的问题,因此要经过对照试验才能验证以上问题。
互相帮助!
4楼2011-06-19 22:53:18
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水水726

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by qdwmq at 2011-06-18 21:44:38:
我们实验室一般是37度1小时,或者4度过夜。

直接放4度过夜可以么?不用室温摇的么?
5楼2011-06-20 09:55:27
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睡着数绵羊

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
lstt09nk(金币+2): 鼓励交流,欢迎常来 2011-06-20 13:13:17
水水726(金币+5): 2011-06-21 21:14:03
1.做个参照好找出原因,
2.就是测蛋白浓度,现在的试剂盒也只能测个大概,误差很大的,要确定下测量值有没有问题,是不是蛋白量少了。
6楼2011-06-20 09:59:08
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qdwmq

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

水水726(金币+5): 2011-06-21 21:13:55
引用回帖:
Originally posted by 水水726 at 2011-06-20 09:55:27:
直接放4度过夜可以么?不用室温摇的么?

我们都不摇 效果也挺好的
7楼2011-06-20 13:15:15
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