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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于免疫荧光的问题，期待您的回复
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shwkx1987

新虫 (小有名气)

[交流] 关于免疫荧光的问题，期待您的回复 已有4人参与

各位高手，小弟刚开始做贴壁细胞的间接免疫荧光（爬片），做的效果不是很好，怀疑是一抗和二抗孵育的不好，想请教各位做过的高手，在加一抗和二抗这两个步骤时是怎么处理的。期待您的指点。
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1楼 2011-09-13 15:22:43
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不孤鸟

铁虫 (初入文坛)
★ ★ ★
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silicare(金币+2): 谢谢参与 2011-09-17 08:18:22
一抗二抗只要覆盖住玻片就行了，不用加很多，浪费。一般按照说明书的推荐进行稀释。
你的效果不好大概指什么，不够亮还是部位不够确切呢？
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2楼2011-09-14 13:31:09
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shwkx1987

新虫 (小有名气)
恩，就是不够亮。
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3楼2011-09-16 20:53:38
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筱?�

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
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lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-09-17 12:56:10
我在加一抗之前先用透膜液处理了30分钟，但是最后结果也是不够亮，但是比没有透膜的效果好多了
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4楼2011-09-17 09:15:02
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shwkx1987

新虫 (小有名气)
???????:
4?: Originally posted by ???? at 2011-09-17 09:15:02:
???????????????????????30????????????????????????????????????Ч???????

?????PBS??pH?????????????pH????????
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5楼2011-09-22 14:17:10
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shwkx1987

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 不孤鸟 at 2011-09-14 13:31:09:
一抗二抗只要覆盖住玻片就行了，不用加很多，浪费。一般按照说明书的推荐进行稀释。
你的效果不好大概指什么，不够亮还是部位不够确切呢？

恩。就是荧光不够亮。我把抗体浓度增大还是一样的效果，会不会是pbs的pH不合适呢
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6楼2011-09-22 14:18:39
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筱?�

新虫 (初入文坛)
★
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引用回帖:
5楼: Originally posted by shwkx1987 at 2011-09-22 14:17:10:
你用的PBS的pH是多少啊？你觉得pH的影响大吗？

pH是7.4，洗液pH是7.6，应该不是pH的问题，我后来做了另外一个蛋白的荧光染色，荧光强度就比之前的好，不知道是不是抗体的问题。
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7楼2011-09-22 15:05:31
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shwkx1987

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 不孤鸟 at 2011-09-14 13:31:09:
一抗二抗只要覆盖住玻片就行了，不用加很多，浪费。一般按照说明书的推荐进行稀释。
你的效果不好大概指什么，不够亮还是部位不够确切呢？

你好。你用的玻片是多大的？我用的是普通盖玻片，放在载玻片上操作的。一抗二抗加上去后，稍有不平就回流掉。现在就这一难题找不到解决办法，你能与我分享下你的经验吗？
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8楼2011-09-28 14:41:48
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elon_ma

禁言 (初入文坛)
★
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本帖内容被屏蔽
9楼2012-05-08 20:11:06
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废哥117

银虫 (小有名气)
引用回帖:
1955047楼: Originally posted by shwkx1987 at 2011-09-28 14:41:48
你好。你用的玻片是多大的？我用的是普通盖玻片，放在载玻片上操作的。一抗二抗加上去后，稍有不平就回流掉。现在就这一难题找不到解决办法，你能与我分享下你的经验吗？...

应该不会流掉啊，你把一抗二抗滴到盖玻片上，由于表面张力会形成一个椭球状（注意不要加太多，一般的小圆盖玻片40或者50ul就可以了），掌握好这个度你的一抗二抗应该不会流出的，操作一定要轻柔，尤其是封片的时候，不要一下盖上去，不然会有气泡，而且也会影响细胞形态
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不断提高自己
10楼2012-05-30 13:37:35
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