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林�?

木虫 (小有名气)

[求助] 关于昆虫细胞的免疫荧光定位的问题

我现在做得是Bt蛋白受体在昆虫细胞中进行表达,表达后的细胞和Bt蛋白进行孵育,然后用PBS洗细胞,多聚甲醛固定,PBS洗细胞,然后加一抗(Bt蛋白的特抗),PBS洗细胞,加FITC-二抗,洗细胞。最后在荧光倒置显微镜下观察。
我现在的问题是:表达的细胞有绿色荧光,正常细胞做对照(没有表达受体)也有荧光。这是怎么回事?着急啊!跪等毕业啊!
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mlbiosci

新虫 (正式写手)

对照荧光很明显吗,做共聚焦有时会有自发荧光,细胞上也会有,这种情况下要扣除背景音乐另一个情况,你得抗体可能存在非特异性结合。

发自小木虫Android客户端
2楼2016-01-25 23:42:15
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林�?

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by mlbiosci at 2016-01-25 23:42:15
对照荧光很明显吗,做共聚焦有时会有自发荧光,细胞上也会有,这种情况下要扣除背景音乐另一个情况,你得抗体可能存在非特异性结合。

对照很明显的,你是说二抗存在非特异性结合?
3楼2016-01-26 08:22:22
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