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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 关于昆虫细胞的免疫荧光定位的问题
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林�?

木虫 (小有名气)

[求助] 关于昆虫细胞的免疫荧光定位的问题

我现在做得是Bt蛋白受体在昆虫细胞中进行表达，表达后的细胞和Bt蛋白进行孵育，然后用PBS洗细胞，多聚甲醛固定，PBS洗细胞，然后加一抗（Bt蛋白的特抗），PBS洗细胞，加FITC-二抗，洗细胞。最后在荧光倒置显微镜下观察。
我现在的问题是：表达的细胞有绿色荧光，正常细胞做对照（没有表达受体）也有荧光。这是怎么回事？着急啊！跪等毕业啊！
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1楼 2016-01-25 22:38:25
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mlbiosci

新虫 (正式写手)
对照荧光很明显吗，做共聚焦有时会有自发荧光，细胞上也会有，这种情况下要扣除背景音乐另一个情况，你得抗体可能存在非特异性结合。

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2楼2016-01-25 23:42:15
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林�?

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by mlbiosci at 2016-01-25 23:42:15
对照荧光很明显吗，做共聚焦有时会有自发荧光，细胞上也会有，这种情况下要扣除背景音乐另一个情况，你得抗体可能存在非特异性结合。

对照很明显的，你是说二抗存在非特异性结合？
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3楼2016-01-26 08:22:22
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