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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告

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林�?

木虫 (小有名气)

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专业: 果树学

[求助] 关于昆虫细胞的免疫荧光定位的问题

我现在做得是Bt蛋白受体在昆虫细胞中进行表达，表达后的细胞和Bt蛋白进行孵育，然后用PBS洗细胞，多聚甲醛固定，PBS洗细胞，然后加一抗（Bt蛋白的特抗），PBS洗细胞，加FITC-二抗，洗细胞。最后在荧光倒置显微镜下观察。
我现在的问题是：表达的细胞有绿色荧光，正常细胞做对照（没有表达受体）也有荧光。这是怎么回事？着急啊！跪等毕业啊！

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1楼 2016-01-25 22:38:25

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mlbiosci

新虫 (正式写手)

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对照荧光很明显吗，做共聚焦有时会有自发荧光，细胞上也会有，这种情况下要扣除背景音乐另一个情况，你得抗体可能存在非特异性结合。

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2楼2016-01-25 23:42:15

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林�?

木虫 (小有名气)

应助: 1 (幼儿园)
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专业: 果树学

引用回帖:

2楼: Originally posted by mlbiosci at 2016-01-25 23:42:15
对照荧光很明显吗，做共聚焦有时会有自发荧光，细胞上也会有，这种情况下要扣除背景音乐另一个情况，你得抗体可能存在非特异性结合。

对照很明显的，你是说二抗存在非特异性结合？

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3楼2016-01-26 08:22:22

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