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nuclearfan银虫 (小有名气)
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[求助]
关于双标的免疫荧光很大困惑！！！
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求高手解答：本人用免疫荧光检测一个复杂细胞类型的组织切片某蛋白的表达，用一个mouse源的抗体标记细胞类型，用另一个Rabbit源的抗体标记这个蛋白。在此之前我已经用DAB的IHC（ABC法）对单独的抗体实验成功，对照同样没有问题，分别的抗体阳性的细胞类型应该是部分重合或根本不重合。免疫荧光的2抗是488标的donkey anti-Mouse和594标的donkey anti-Rabbit（都是Santa的），封闭使用的羊血清不少于3小时，一抗1：100稀释4度过夜，洗涤5X3，二抗1：200 RT 1小时。这几次的结果是通过merge后 完全重合。后来我补充了个实验，只用单一的mouse源一抗和抗mouse的2抗做了个简单的对照（488），分别用绿光 蓝光 黄光激发，发现都能打出相同位置的光，只是颜色不同（普通的电镜不是共聚焦）。 我很困惑，求高手耐心解答！！在线等！！如有不明确的，可以指出，我重新说明 |
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