24小时热门版块排行榜

返回列表

nuclearfan

银虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 196
散金: 151
红花: 1
帖子: 108
在线: 18.3小时
虫号: 520945
注册: 2008-03-08
性别: GG
专业: 动物遗传学

[求助] 关于双标的免疫荧光很大困惑！！！

求高手解答：本人用免疫荧光检测一个复杂细胞类型的组织切片某蛋白的表达，用一个mouse源的抗体标记细胞类型，用另一个Rabbit源的抗体标记这个蛋白。在此之前我已经用DAB的IHC（ABC法）对单独的抗体实验成功，对照同样没有问题，分别的抗体阳性的细胞类型应该是部分重合或根本不重合。免疫荧光的2抗是488标的donkey anti-Mouse和594标的donkey anti-Rabbit（都是Santa的），封闭使用的羊血清不少于3小时，一抗1：100稀释4度过夜，洗涤5X3，二抗1：200 RT 1小时。这几次的结果是通过merge后完全重合。后来我补充了个实验，只用单一的mouse源一抗和抗mouse的2抗做了个简单的对照（488），分别用绿光蓝光黄光激发，发现都能打出相同位置的光，只是颜色不同（普通的电镜不是共聚焦）。
我很困惑，求高手耐心解答！！在线等！！如有不明确的，可以指出，我重新说明

回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

请问免疫荧光双标一抗二抗可以同时加入吗已经有4人回复

1楼 2013-02-23 16:35:33

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

yanjun_guo

铁虫 (正式写手)

应助: 8 (幼儿园)
金币: 3395.3
帖子: 752
在线: 82.6小时
虫号: 573997
注册: 2008-06-15
专业: 细胞死亡

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

mouse源的抗体标记细胞类型：标记在细胞的那个部位？是细胞质？细胞膜还是细胞核？检测蛋白的抗体又是表达在细胞的那个部位？在做单独的抗体实验的时候应该能够确定的。
“这几次的结果是通过merge后完全重合”只能说明，2者表达部位有重叠。表达部位相同。
根据我的经验，感觉“分别用绿光蓝光黄光激发，发现都能打出相同位置的光，只是颜色不同”的现象好像是显微镜的问题。我以前也出现过，后来找厂家来调节的。