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crossgate2

金虫 (小有名气)

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[求助] 请教诱导人类骨髓间充质干细胞向成骨方向分化的相关问题

小弟最近准备开展关于“蛋白质诱导人类骨髓间充质细胞成骨分化”的研究。之前养的一直是MC3T3-E1预成骨细胞，现在换了一种细胞，有一些问题希望能向大家请教请教。

      1、研究蛋白质诱导人类骨髓间充质干细胞的成骨分化，最好采用第几代的hBMCs呢？为什么呢？
      2、用CCK-8表征蛋白质对于hBMCs的增殖作用，培养基是否需要加成骨诱导成分（β-甘油磷酸钠、抗坏血酸）？
      3、测ALP活性，时间节点/培养板/细胞接种数目应该如何选取呢？准备分别选取5、10、15、20天/48孔板/1万个细胞每孔  是否合适？
      4、关于茜素红染色，时间节点选择7/14/21天是否合适？
      5、关于RT-PCR，想外包给公司测一下runx-2、OCN（骨钙蛋白）、COL-I（I型胶原）、OPN（骨桥蛋白）表达，时间节点如何选取比较好呢？还有没有其他需要注意的事项（细胞密度/培养板选取  等等）？
      6、能否推荐一些关于干细胞的成骨分化的免疫荧光染色或者是一些其他的表征手段呢？

      目前主要想到这些问题，希望能够得到一些指点。
      另外，祝大家天天有数据，月月有文章！！

[ Last edited by crossgate2 on 2013-6-28 at 21:55 ]

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1楼2013-06-28 16:22:38

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r123ed

金虫 (著名写手)

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【答案】应助回帖

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crossgate2: 金币+30, ★★★★★最佳答案 2013-07-14 22:58:59
红舟流星: 金币+1, 应助指数+1, 欢迎来生物材料板块应助交流 2013-07-15 21:55:52
markar: 金币+1, BM-EPI+1, 感谢回帖交流！ 2013-07-15 22:08:07

1、研究蛋白质诱导人类骨髓间充质干细胞的成骨分化，最好采用第几代的hBMCs呢？为什么呢？
当然是原代了，可塑性强，传代的培养过程干细胞不一定往成骨方向跑，可能往成纤维跑了4,5代了，你再去往成骨跑，不是南辕北辙了。
      2、用CCK-8表征蛋白质对于hBMCs的增殖作用，培养基是否需要加成骨诱导成分（β-甘油磷酸钠、抗坏血酸）？
增殖跟分化两个概念，你要是诱导成骨，就加，不诱导，不加。
      3、测ALP活性，时间节点/培养板/细胞接种数目应该如何选取呢？准备分别选取5、10、15、20天/48孔板/1万个细胞每孔  是否合适？
ALP试剂盒上有相应的说明，从你说的，应该是合适的。
      4、关于茜素红染色，时间节点选择7/14/21天是否合适？
没问题，前提是你加了诱导剂
      5、关于RT-PCR，想外包给公司测一下runx-2、OCN（骨钙蛋白）、COL-I（I型胶原）、OPN（骨桥蛋白）表达，时间节点如何选取比较好呢？还有没有其他需要注意的事项（细胞密度/培养板选取  等等）？
这都取决于你的实验咯，提醒你一点，基因表达在蛋白表达之前，后续是否测蛋白？其他的注意事项，就是给外包公司搞搞价钱吧，这里水很深的。
      6、能否推荐一些关于干细胞的成骨分化的免疫荧光染色或者是一些其他的表征手段呢？
茜素红就够了吧，免疫荧光要染什么啊，当然最直观的当然是动物体内实验啦，一上动物，你就会发现连BMP2什么的都不一定好使。