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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助：western blotting一抗有关问题
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喵汪

银虫 (小有名气)

[求助] 求助：western blotting一抗有关问题

做western blot时要先用一抗，再用HRP标记的二抗，
为什么不能直接用HRP标记的一抗呢？
还有，我试过了，先用金标一抗，再用HRP标记的二抗也做不出来，为什么一抗改成金标一抗就不行了呢？
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1楼 2012-06-20 23:17:10
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喵汪

银虫 (小有名气)
有木有人回？
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2楼2012-06-21 18:26:14
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Alisa_lin

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一抗用于识别你的目的蛋白，二抗识别一抗
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3楼2012-06-22 09:13:32
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Alisa_lin

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Alisa_lin at 2012-06-22 09:13:32
一抗用于识别你的目的蛋白，二抗识别一抗

二抗和一抗结合，并带有可以被检测出的标记(如带荧光、放射性、化学发光或显色基团），作用是检测一抗。  标记的是二抗吧
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4楼2012-06-22 09:20:22
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喵汪

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Alisa_lin at 2012-06-22 09:13:32
一抗用于识别你的目的蛋白，二抗识别一抗

为什么不能直接用HRP标记的一抗呢?先用金标一抗，再用HRP标记的二抗为什么也做不出来?
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5楼2012-06-22 21:06:25
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freerain

禁虫 (职业作家)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
6楼2012-06-23 05:42:02
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mlanqiang

木虫之王 (文学泰斗)

蓝博士

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
直接标一抗信号不够，检测不到信号，二抗有协同放大功能。
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蓝精灵
7楼2012-06-23 06:02:56
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yyk81

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
善于思考的人!赞一个。现在很多western 都开始只用一抗了，HRP直接标一抗，效果还可以，也可以通过生物素标记放大信号。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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学无止境！
8楼2012-06-23 06:36:32
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sayaya

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不是不能直接用HRP标记一抗，如果要这么做，是完全可以的。
WB本身就分直接法，间接法等，所谓直接法就是直接标记一抗，但实践中更多采用标记二抗的间接法。
之所以，一般都采用标记二抗的方法，原因有两个：
1，若果你的一抗种类比较多，那就得一个一个地标记，很麻烦不是？
2，直接标记一抗，只能结合少量标记物，而标记二抗以后，一抗可以结合不止一个二抗分子，所以可以通过二抗来增强信号，使WB结果更清晰。
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9楼2012-06-23 10:46:33
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喵汪

银虫 (小有名气)
谢谢各位的回复，明白了。
可是还是想不通为什么金标的一抗做不出来？
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10楼2012-06-23 13:53:26
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