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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 小分子蛋白的western blotting注意事项
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15895241331

铁虫 (正式写手)

[求助] 小分子蛋白的western blotting注意事项

本人要跑11到17kD的蛋白质，做了两次无结果，分离胶15%，电泳100V 1.5h，转膜350mA 45min， 封闭1h。求高搜指点一二！
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1楼2013-06-06 14:08:29
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15895241331

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by zhanged66 at 2013-06-17 08:35:34
我觉的胶的浓度稍微再高一点，这个自己调整，我不太清湖，没有做过这么小的蛋白。转膜电流有点高。转膜的时候产热高不高，这也会影响最终的结果。转膜时间是更具自己的实验来调整的，我的40kDa的蛋白砖膜时间1.5h， ...

转膜时间调至35min，350mA后来就出来的结果了。谢谢
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10楼2013-07-11 18:26:18
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kx444555

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
15895241331(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-06-07 08:52:17
建议做梯度胶跑SDS-PAGE，比如4%-20%
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星陈代谢
2楼2013-06-06 15:18:01
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songzuowei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
15895241331(myprayer代发): 金币+1, Send person rose fragrance in hand, thank you loosen one's purse strings generously, look forward to your wonderful 2013-06-07 08:52:29
我认为一你的封闭时间太短，37°至少两小时，二 转膜时间太长，这么小的蛋白，半干转15min就足够了
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15895241331
3楼2013-06-06 16:39:57
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15895241331

铁虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by songzuowei at 2013-06-06 16:39:57
我认为一你的封闭时间太短，37°至少两小时，二 转膜时间太长，这么小的蛋白，半干转15min就足够了

我们做的是组蛋白，在提取蛋白样品的时候有木有什么特别的注意事项？，这个小蛋白需要封闭这么长时间吗？我们转膜用的是湿转
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4楼2013-06-07 12:14:04
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