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bigbangrex

铁杆木虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
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[交流] 【求助/交流】极小分子与极大分子蛋白的Western Bloting转膜求助！

如题，我最近想做6kd，7.5kd和300kd的三个蛋白western，查阅了文献说小分子要用三甲基甘氨酸体系电泳，0.2um的膜，跑了电泳但是总是转不出来，还有那个大分子蛋白，也老是转不出来，老板怒了，急死我了。
我实验室是六一仪器厂的湿转体系，请问有没有高手指点一下两种极端蛋白的转膜时间或注意事项条件什么的，谢谢了！

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1楼2010-11-25 20:50:34

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robustli

银虫 (小有名气)

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★
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wet transfer glycine 14.4g, trisbase 3.03g add water to 800ml the add 200ml methanol. i never transfer 7.5kd protein, but i think you need short transfer time like 25min 75v, for large protein i have done 400kd, 80v 50min. very successful