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yananjizhu

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】转膜 已有7人参与

大家好,我最近做180kd蛋白的westernblot,想请教下你们的转膜条件,我用的是300mA的恒流,转膜两个小时,最后显色时看见条带还可以,就是特别的淡,应该说很淡,是不是没有转膜完全呀?谢谢大家,请支招。
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tianhuijuan

金虫 (小有名气)

★ ★
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rainwander(金币+1):鼓励参与解答 2010-12-07 08:25:15
我们一般用60mA 2 h 不过丽春红染色基本上老不成功,不只是温度低还是其他原因。染色前预热也不行..
2楼2010-12-06 23:08:21
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tianhuijuan

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by tianhuijuan at 2010-12-06 23:08:21:
我们一般用60mA 2 h 不过丽春红染色基本上老不成功,不只是温度低还是其他原因。染色前预热也不行..

我们的蛋白分子量较小 23KD  70kD常用
3楼2010-12-06 23:09:29
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yananjizhu

新虫 (初入文坛)

哦 这样呀 你为什么不用250mA转试一下  转一个半小时
4楼2010-12-07 06:51:52
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
湿转的么?分子量太大了。
52187644
5楼2010-12-07 08:39:09
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tianhuijuan

金虫 (小有名气)

★ ★
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dhd997(金币+1):谢谢交流 2010-12-09 08:51:03
引用回帖:
Originally posted by yananjizhu at 2010-12-07 06:51:52:
哦 这样呀 你为什么不用250mA转试一下  转一个半小时

我们实验室一直用60mA 2h (0.8mA /cm 2     1.5h ,膜裁的是6*9,理论算0.8*54=43.2mA   1.5h即可),按说应该转移完全的,顺便说一下用的半干法转移.你们每次染色都顺利吗? 多谢
6楼2010-12-07 14:44:57
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yananjizhu

新虫 (初入文坛)

恩 按我们的条件 可以转过去 染膜能看见t条带
7楼2010-12-07 22:37:18
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yananjizhu

新虫 (初入文坛)

就是湿转
8楼2010-12-07 22:38:17
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bigbangrex

铁杆木虫 (小有名气)

★ ★
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dhd997(金币+1):谢谢交流 2010-12-09 08:51:57
时间太少,湿转300mA起码3个小时,或者一抗不好,其实一抗好才是真的好!
9楼2010-12-07 22:59:53
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wangleisdnu

金虫 (正式写手)

★ ★
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dhd997(金币+1):谢谢交流 2010-12-09 08:52:15
推荐一个prestain 蛋白marker 可以通过180kD的marker来估计你的蛋白转的效率



[ Last edited by wangleisdnu on 2010-12-8 at 04:39 ]
有勇气去改变你可以改变的,有度量去容忍你不能改变的,有智慧去区分上面的两种情况http://bbs.bioon.net/bbs/?66210
10楼2010-12-08 04:37:57
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