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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助Western-bot转膜问题
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muzihai

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
1949stone(金币+2): 鼓励 2011-06-04 09:52:57
我之前做转膜，分子量60左右，一般130ma转1.5小时，另外你可以把胶染色看看是不是没转过去或者放反了。仔细检查一下，总之任何错误都会导致实验失败。
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没有过不去的事情，只有过不去的心情！
11楼2011-06-04 09:22:51
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blueghost006

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by muzihai at 2011-06-04 09:22:51:
我之前做转膜，分子量60左右，一般130ma转1.5小时，另外你可以把胶染色看看是不是没转过去或者放反了。仔细检查一下，总之任何错误都会导致实验失败。

我昨晚又仔细重做了一次，转膜1小时，发现转膜成功了，我染那个胶发现上面还是有蛋白痕迹，下次会进一步摸索最佳转膜时间，呵呵，谢谢你的提醒，我发现我是比较粗心，以后会更仔细的做~~~~
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12楼2011-06-04 11:34:56
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blueghost006

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by elvias at 2011-06-03 23:30:43:
你是不是转膜时放反方向了

没有转反方向哦~~~~我确定~~~呵呵，可能是之前的步骤有不足~~~所以就失败了~~~
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13楼2011-06-04 11:35:55
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yj507

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

这么纠结。。。
如果你的buffer没问题、仪器没问题、操作没问题，就做一个转膜时间测试吧，10分钟、20分钟、30分钟看看你的胶和PVDF膜上的情况。而且你师兄师姐都有做这个实验，可以请他们在你做的时候指导一下啊，另外就是问问他们试剂有没有什么问题。
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14楼2011-06-04 13:29:07
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blueghost006

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by yj507 at 2011-06-04 13:29:07:
这么纠结。。。
如果你的buffer没问题、仪器没问题、操作没问题，就做一个转膜时间测试吧，10分钟、20分钟、30分钟看看你的胶和PVDF膜上的情况。而且你师兄师姐都有做这个实验，可以请他们在你做的时候指导一下啊 ...

问题解决了~~~呵呵~~~~转膜成功~~~唉~~~谢谢各位~~~不过我接下的路更艰难，没有抗体了，面临自己制备抗体~~~~
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15楼2011-06-05 21:57:16
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terry130

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by blueghost006 at 2011-06-05 21:57:16:
问题解决了~~~呵呵~~~~转膜成功~~~唉~~~谢谢各位~~~不过我接下的路更艰难，没有抗体了，面临自己制备抗体~~~~

既然解决了能不能说说到底是哪出错了？？？给后来人点提示。
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摒气动方息，宁神心自明。
16楼2011-06-06 08:40:54
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allegory

禁虫 (著名写手)
★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-06-07 16:52:39
本帖内容被屏蔽
17楼2011-06-06 09:47:40
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gppwfh

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-06-07 16:52:48
你转膜后，如果没有转上，那么还在胶上，你把胶染下色，看下，是否胶上还有蛋白。如果有，就说明你没有转到膜上。
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18楼2011-06-07 14:54:28
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chong0206

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
西瓜(金币+4): 欢迎新虫交流 2011-06-12 17:47:07
转膜时间太短了 建议电压100v 时间120分钟
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19楼2011-06-12 14:27:10
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nuoyaeva

铁杆木虫 (正式写手)
湿转一般不会存在转过的情况吧...不像我，用的semi-dry倒是很容易出现转过了的情况，不过还好实验室已经把条件摸好了...
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生活是美好的
20楼2011-06-13 15:32:09
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