应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助Western-bot转膜问题
52/1返回列表
查看: 3656  |  回复: 25
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

blueghost006

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助Western-bot转膜问题

各位大虾，
    小子我初学做Western-blot,做了三次，每次转膜后发现PVDF膜上没有一点MARK痕迹，（转膜前胶上MARK条带非常清楚），我用的是湿转法，100V，45分钟，目标蛋白为41KD，当然接下来的结果就是膜上什么都没有，一片空白，这是怎么回事呀？小子我都快崩溃了，敬请各位大虾指点迷津~~~~
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2011-06-02 21:22:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

terry130

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by blueghost006 at 2011-06-05 21:57:16:
问题解决了~~~呵呵~~~~转膜成功~~~唉~~~谢谢各位~~~不过我接下的路更艰难，没有抗体了，面临自己制备抗体~~~~

既然解决了能不能说说到底是哪出错了？？？给后来人点提示。
赞一下 回复此楼
摒气动方息，宁神心自明。
16楼2011-06-06 08:40:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 26 个回答

ET生物人

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 鼓励交流 2011-06-03 09:49:31
可能mark和目的蛋白被转移出去了！！你尝试降低电压到90V或减短转移的时间！！
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-06-03 09:48:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

terry130

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
西瓜(金币+5): Good! 2011-06-03 18:30:18
跟楼上观点相反，100v没问题，45分钟只能说短，绝对不算长。marker在这个条件下应该会转过去的。感觉LZ的问题不再这里。看看你的buffer是否正确，如果别人用没问题的话就不是buffer的问题。另外一个容易忽视的事情是在转膜前你的pvdf膜要先用甲醇浸泡几分钟再放到buffer中做夹心。没有甲醇活化的话就会出现你这种情况，不只是marker你的蛋白也转不上去。LZ是不是没有活化？？？
赞一下(1人) 回复此楼
摒气动方息，宁神心自明。
4楼2011-06-03 16:24:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blueghost006

新虫 (初入文坛)
我活化了哦~~~~~转膜试剂体系都是严格按照师兄他们的体系配制的哦~~我这次加大转膜时间，用一小时试试~~~
赞一下 回复此楼
5楼2011-06-03 18:00:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 26 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 4/200 2026-08-30 07:28 by ZPa0EcMwuECS
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 4/200 2026-08-30 07:17 by ZPa0EcMwuECS
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 4/200 2026-08-30 06:57 by ZPa0EcMwuECS
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 7/350 2026-08-30 06:10 by ZPa0EcMwuECS
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +7 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 11/550 2026-08-30 05:40 by ZPa0EcMwuECS
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 13/650 2026-08-30 05:38 by ZPa0EcMwuECS
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 7/350 2026-08-30 01:36 by ZPa0EcMwuECS
[论文投稿] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-30 01:25 by ZPa0EcMwuECS
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 5/250 2026-08-30 00:41 by ZPa0EcMwuECS
[基金申请] 国社科申报系统有变化 +3 kynobel 2026-08-23 3/150 2026-08-29 21:57 by 余韵清
[基金申请] 为什么到现在没收到通知？ +4 tannykie 2026-08-29 4/200 2026-08-29 17:14 by lmz0216
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已，这评审意见是按照杰青的条件评的吧？ +6 gouxfjh 2026-08-28 9/450 2026-08-29 09:59 by jklily
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜？ 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭