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kittyamanda

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 20.4
帖子: 16
在线: 4.4小时
虫号: 1687202
注册: 2012-03-13
专业: 动物遗传学

[求助] 104KD的蛋白，做western blot电泳和转膜时间及膜的选择？

我现在要做一个104KD的蛋白，做western blot，想问一下电泳和转膜的电压电流和时间及膜的选择，是选PVDF膜还是NC膜？还有一抗二抗结合时间。

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1楼 2012-12-11 17:54:59

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哈哈大姑爷

至尊木虫 (知名作家)

应助: 24 (小学生)
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专业: 蛋白质组学

相互学习

ＧＯ　ＯＮ

7楼2012-12-17 00:52:39

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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

BioEPI: 4
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专业: 生物化学

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-12-17 15:19:31

大蛋白转得慢一些，比你平时做一般蛋白多转一倍的时间就可以了。如果觉得太慢，适当加大一点电压电流。膜应该都可以吧。我比较喜欢PVDF。抗体结合时间应该与抗体效价有关，和蛋白分子量大小没什么关系吧。

2楼2012-12-12 08:20:41

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lvanmorison

禁虫 (初入文坛)

感谢参与，应助指数 +1

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3楼2012-12-13 00:15:43

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luobugou

木虫 (正式写手)

应助: 4 (幼儿园)
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专业: 糖尿病

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

PVDF膜，100V150min，一抗一般4度过夜，二抗室温1小时

4楼2012-12-13 03:50:57

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