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kittyamanda

新虫 (初入文坛)

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[求助] 104KD的蛋白，做western blot电泳和转膜时间及膜的选择？

我现在要做一个104KD的蛋白，做western blot，想问一下电泳和转膜的电压电流和时间及膜的选择，是选PVDF膜还是NC膜？还有一抗二抗结合时间。

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1楼 2012-12-11 17:54:59

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lengjing1986

木虫 (正式写手)

博士

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流经验 2012-12-17 15:19:50
kittyamanda: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-12-21 11:43:24

这么大的蛋白其实比较容易做的。我一直在做ubiquitination的实验，蛋白大小从70K-200K不等。我推荐给你的条件是：电泳：80V、30min 让蛋白压一压，平一点，这样你的带会比较好看；然后用100V跑电泳，大概一个半小时就差不多了，具体时间你可以通过Marker观察，电泳电压一定不要太大，否则产生的热量太多，蛋白带就不好看了。转膜过程，80V、100分钟，足够了。做不好找我。这实验很简单的。