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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » western blot抗体选择与操作
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lflishan

木虫 (正式写手)

[求助] western blot抗体选择与操作

如果一块胶转膜后需要用两种抗体，可以同时加两种抗体孵育吗？具体怎么操作呢？实验室没有人做过，急求助。。。另外，如果一种抗体是兔源的，而actin是鼠源的，二抗只有抗兔的，能用吗
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1楼2013-01-14 11:16:52
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nlbtr

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lflishan: 金币+2, ★有帮助 2013-01-14 22:19:46
第一个问题：可以同时孵育，我没做过，但是我知道有人做过，可以自己先摸索下，方法自己建立的才是最好的；
第二个问题，不行，要同源的。如果可以的话，二抗就不需要分来源了。
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2楼2013-01-14 12:50:25
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xiaoqi5992

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lflishan: 金币+2, ★有帮助 2013-01-14 22:19:56
第一个问题：理论上可以，但是有些抗体混合在一起会产生沉淀，如果不产生沉淀的话，你可以摸摸条件，和一种抗体标的操作差不多。
第二个问题：只能用同源的，抗兔的二抗对应兔来源的一抗。
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3楼2013-01-14 13:14:59
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lflishan: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-01-14 22:20:19
1. 如果两个目标蛋白在胶上的位置有明显差别是可以的，如果你不在乎把一抗混合的话。如果同时做，注意两个抗体的检出限要差不多。如果一个抗体很弱一个很强的话，效果会很不好。我一般是孵育完一个一抗，洗膜后直接放另一个一抗孵育，这样可以根据抗体的灵敏程度确定孵育时间的长短。洗膜后加二抗，两个一起检测。
2. 肯定不行的。二抗是识别一抗的IgG, 抗兔的二抗只能识别兔的一抗。
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4楼2013-01-14 15:33:18
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lflishan

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-14 15:33:18
1. 如果两个目标蛋白在胶上的位置有明显差别是可以的，如果你不在乎把一抗混合的话。如果同时做，注意两个抗体的检出限要差不多。如果一个抗体很弱一个很强的话，效果会很不好。我一般是孵育完一个一抗，洗膜后直接 ...

一抗说明书中写可以和其他一些动物的有交叉反应性，是什么意思呢？
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5楼2013-01-15 09:54:44
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
lflishan: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-01-15 10:11:39
引用回帖:
5楼: Originally posted by lflishan at 2013-01-15 09:54:44
一抗说明书中写可以和其他一些动物的有交叉反应性，是什么意思呢？...

我认为是指一抗本身是抗某种动物的某个蛋白，但也可以识别一些其他动物来源的同源蛋白。
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6楼2013-01-15 10:01:10
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lflishan

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-15 10:01:10
我认为是指一抗本身是抗某种动物的某个蛋白，但也可以识别一些其他动物来源的同源蛋白。...

哦，谢谢，还以为是可以识别其他动物的二抗呢。。。
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7楼2013-01-15 10:11:26
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