24小时热门版块排行榜    

查看: 2332  |  回复: 6

lflishan

木虫 (著名写手)

[求助] western blot抗体选择与操作

如果一块胶转膜后需要用两种抗体,可以同时加两种抗体孵育吗?具体怎么操作呢?实验室没有人做过,急求助。。。另外,如果一种抗体是兔源的,而actin是鼠源的,二抗只有抗兔的,能用吗
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nlbtr

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lflishan: 金币+2, 有帮助 2013-01-14 22:19:46
第一个问题:可以同时孵育,我没做过,但是我知道有人做过,可以自己先摸索下,方法自己建立的才是最好的;
第二个问题,不行,要同源的。如果可以的话,二抗就不需要分来源了。
2楼2013-01-14 12:50:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoqi5992

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lflishan: 金币+2, 有帮助 2013-01-14 22:19:56
第一个问题:理论上可以,但是有些抗体混合在一起会产生沉淀,如果不产生沉淀的话,你可以摸摸条件,和一种抗体标的操作差不多。
第二个问题:只能用同源的,抗兔的二抗对应兔来源的一抗。
3楼2013-01-14 13:14:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lflishan: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-01-14 22:20:19
1. 如果两个目标蛋白在胶上的位置有明显差别是可以的,如果你不在乎把一抗混合的话。如果同时做,注意两个抗体的检出限要差不多。如果一个抗体很弱一个很强的话,效果会很不好。我一般是孵育完一个一抗,洗膜后直接放另一个一抗孵育,这样可以根据抗体的灵敏程度确定孵育时间的长短。洗膜后加二抗,两个一起检测。
2. 肯定不行的。二抗是识别一抗的IgG, 抗兔的二抗只能识别兔的一抗。
4楼2013-01-14 15:33:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lflishan

木虫 (著名写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-14 15:33:18
1. 如果两个目标蛋白在胶上的位置有明显差别是可以的,如果你不在乎把一抗混合的话。如果同时做,注意两个抗体的检出限要差不多。如果一个抗体很弱一个很强的话,效果会很不好。我一般是孵育完一个一抗,洗膜后直接 ...

一抗说明书中写可以和其他一些动物的有交叉反应性,是什么意思呢?
5楼2013-01-15 09:54:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


lflishan: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-01-15 10:11:39
引用回帖:
5楼: Originally posted by lflishan at 2013-01-15 09:54:44
一抗说明书中写可以和其他一些动物的有交叉反应性,是什么意思呢?...

我认为是指一抗本身是抗某种动物的某个蛋白,但也可以识别一些其他动物来源的同源蛋白。
6楼2013-01-15 10:01:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lflishan

木虫 (著名写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-15 10:01:10
我认为是指一抗本身是抗某种动物的某个蛋白,但也可以识别一些其他动物来源的同源蛋白。...

哦,谢谢,还以为是可以识别其他动物的二抗呢。。。
7楼2013-01-15 10:11:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lflishan 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 00:12 by vZfe6xYu34yj
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-14 23:45 by vZfe6xYu34yj
[考博] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-14 23:33 by vZfe6xYu34yj
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-14 23:13 by vZfe6xYu34yj
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 3/150 2026-09-14 23:09 by vZfe6xYu34yj
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:45 by vZfe6xYu34yj
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 6/300 2026-09-14 22:37 by vZfe6xYu34yj
[考研] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:25 by vZfe6xYu34yj
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:01 by vZfe6xYu34yj
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:00 by vZfe6xYu34yj
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 4/200 2026-09-14 21:37 by vZfe6xYu34yj
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-14 21:25 by vZfe6xYu34yj
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 7/350 2026-09-14 21:21 by vZfe6xYu34yj
[考博] 上海工程技术大学激光智能制造课题组招收博士研究生 +4 两三岁ss 2026-09-14 4/200 2026-09-14 20:29 by 班主任的同桌
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 4/200 2026-09-14 16:13 by Aj1rhIDL5ixY
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 6/300 2026-09-14 15:21 by Aj1rhIDL5ixY
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 3/150 2026-09-14 15:09 by Aj1rhIDL5ixY
[考研] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 3/150 2026-09-14 14:57 by Aj1rhIDL5ixY
[找工作] 浙江师范大学是怎么坑我的 +6 recruit123 2026-09-09 6/300 2026-09-14 12:00 by 萨仁其其格
[教师之家] 浙江师范大学是怎么坑我的 +10 recruit123 2026-09-09 15/750 2026-09-13 10:45 by seaskyy
信息提示
请填处理意见