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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 未纯化血清抗体做western blot时，按多少比例稀释
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lcdshanshi

铁虫 (小有名气)

[求助] 未纯化血清抗体做western blot时，按多少比例稀释

如题，肽段免疫的兔子，得到了一管未纯化的血清，准备用其做western blot，请问按多少比例稀释，是否可以5%的no-fat milk。另外用血清做一抗有没有需要注意的地方，相对于商品化的纯化抗体。
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相聚在M
1楼 2012-09-24 16:21:48
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼主可以试一下不同的梯度，找到一个最佳的稀释度，我们是这样做的
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jiayoubashaonian
2楼2012-09-24 20:59:57
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lcdshanshi

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by blackrose8089 at 2012-09-24 20:59:57
楼主可以试一下不同的梯度，找到一个最佳的稀释度，我们是这样做的

那请问你们一般都是一比多少？1:100吗？
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相聚在M
3楼2012-09-24 22:05:06
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
嗯.................
       个人觉得需先ELISA确认效价后再来做吧，基本上血清我们一般都是2000~5000稀释，100左右的那是纯化后的稀释倍数。
       个人看法 若有说错请高手指点
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lcdshanshi
Let God do with it as He wills
4楼2012-09-24 23:53:52
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不同的抗血清差别很大的，建议先稀释个1000倍做一下看，根据结果再定稀释倍数。然后上不同量的样品确定抗体的线性范围。
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5楼2012-09-25 07:31:16
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yuhan131481

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我们是1:100   不过最好做个梯度试验  看看
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6楼2012-09-25 09:08:15
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lcdshanshi

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-09-24 23:53:52
嗯.................
       个人觉得需先ELISA确认效价后再来做吧，基本上血清我们一般都是2000~5000稀释，100左右的那是纯化后的稀释倍数。
       个人看法 若有说错请高手指点

1:100稀释今天看了下 ，一团黑 准备做个梯度。谢谢您的帮助！
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相聚在M
7楼2012-09-25 12:01:46
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lcdshanshi

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-09-25 07:31:16
不同的抗血清差别很大的，建议先稀释个1000倍做一下看，根据结果再定稀释倍数。然后上不同量的样品确定抗体的线性范围。

1:100稀释今天看了下 ，一团黑 准备做个梯度。谢谢您的帮助！
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相聚在M
8楼2012-09-25 12:01:55
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lcdshanshi

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by yuhan131481 at 2012-09-25 09:08:15
我们是1:100   不过最好做个梯度试验  看看

准备做个梯度。谢谢您的帮助！
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相聚在M
9楼2012-09-25 12:02:10
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lcdshanshi

铁虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-09-24 23:53:52
嗯.................
       个人觉得需先ELISA确认效价后再来做吧，基本上血清我们一般都是2000~5000稀释，100左右的那是纯化后的稀释倍数。
       个人看法 若有说错请高手指点

刚开始我感觉血清因为没有纯化，里面的抗体少，所以用高浓度的，今天看了下结果，1S曝光就全黑了。 另外请问为什么纯化后的抗体反而稀释倍数低哪？
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相聚在M
10楼2012-09-25 12:51:32
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