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lcdshanshi

铁虫 (小有名气)

[求助] 未纯化血清抗体做western blot时,按多少比例稀释

如题,肽段免疫的兔子,得到了一管未纯化的血清,准备用其做western blot,请问按多少比例稀释,是否可以5%的no-fat milk。另外用血清做一抗有没有需要注意的地方,相对于商品化的纯化抗体。
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
楼主可以试一下不同的梯度,找到一个最佳的稀释度,我们是这样做的
jiayoubashaonian
2楼2012-09-24 20:59:57
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lcdshanshi

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by blackrose8089 at 2012-09-24 20:59:57
楼主可以试一下不同的梯度,找到一个最佳的稀释度,我们是这样做的

那请问你们一般都是一比多少?1:100吗?
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3楼2012-09-24 22:05:06
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
嗯.................
       个人觉得需先ELISA确认效价后再来做吧,基本上血清我们一般都是2000~5000稀释,100左右的那是纯化后的稀释倍数。
       个人看法 若有说错请高手指点

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Let God do with it as He wills
4楼2012-09-24 23:53:52
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不同的抗血清差别很大的,建议先稀释个1000倍做一下看,根据结果再定稀释倍数。然后上不同量的样品确定抗体的线性范围。
5楼2012-09-25 07:31:16
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yuhan131481

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我们是1:100   不过最好做个梯度试验  看看
6楼2012-09-25 09:08:15
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lcdshanshi

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-09-24 23:53:52
嗯.................
       个人觉得需先ELISA确认效价后再来做吧,基本上血清我们一般都是2000~5000稀释,100左右的那是纯化后的稀释倍数。
       个人看法 若有说错请高手指点

1:100稀释今天看了下 ,一团黑 准备做个梯度。谢谢您的帮助!
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7楼2012-09-25 12:01:46
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lcdshanshi

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-09-25 07:31:16
不同的抗血清差别很大的,建议先稀释个1000倍做一下看,根据结果再定稀释倍数。然后上不同量的样品确定抗体的线性范围。

1:100稀释今天看了下 ,一团黑 准备做个梯度。谢谢您的帮助!
相聚在M
8楼2012-09-25 12:01:55
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lcdshanshi

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by yuhan131481 at 2012-09-25 09:08:15
我们是1:100   不过最好做个梯度试验  看看

准备做个梯度。谢谢您的帮助!
相聚在M
9楼2012-09-25 12:02:10
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lcdshanshi

铁虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-09-24 23:53:52
嗯.................
       个人觉得需先ELISA确认效价后再来做吧,基本上血清我们一般都是2000~5000稀释,100左右的那是纯化后的稀释倍数。
       个人看法 若有说错请高手指点

刚开始我感觉血清因为没有纯化,里面的抗体少,所以用高浓度的,今天看了下结果,1S曝光就全黑了。 另外请问为什么纯化后的抗体反而稀释倍数低哪?
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10楼2012-09-25 12:51:32
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