24小时热门版块排行榜    

查看: 2356  |  回复: 11

lcdshanshi

铁虫 (小有名气)

[求助] 未纯化血清抗体做western blot时,按多少比例稀释

如题,肽段免疫的兔子,得到了一管未纯化的血清,准备用其做western blot,请问按多少比例稀释,是否可以5%的no-fat milk。另外用血清做一抗有没有需要注意的地方,相对于商品化的纯化抗体。
回复此楼
相聚在M
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
楼主可以试一下不同的梯度,找到一个最佳的稀释度,我们是这样做的
jiayoubashaonian
2楼2012-09-24 20:59:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lcdshanshi

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by blackrose8089 at 2012-09-24 20:59:57
楼主可以试一下不同的梯度,找到一个最佳的稀释度,我们是这样做的

那请问你们一般都是一比多少?1:100吗?
相聚在M
3楼2012-09-24 22:05:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
嗯.................
       个人觉得需先ELISA确认效价后再来做吧,基本上血清我们一般都是2000~5000稀释,100左右的那是纯化后的稀释倍数。
       个人看法 若有说错请高手指点

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

Let God do with it as He wills
4楼2012-09-24 23:53:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不同的抗血清差别很大的,建议先稀释个1000倍做一下看,根据结果再定稀释倍数。然后上不同量的样品确定抗体的线性范围。
5楼2012-09-25 07:31:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuhan131481

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我们是1:100   不过最好做个梯度试验  看看
6楼2012-09-25 09:08:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lcdshanshi

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-09-24 23:53:52
嗯.................
       个人觉得需先ELISA确认效价后再来做吧,基本上血清我们一般都是2000~5000稀释,100左右的那是纯化后的稀释倍数。
       个人看法 若有说错请高手指点

1:100稀释今天看了下 ,一团黑 准备做个梯度。谢谢您的帮助!
相聚在M
7楼2012-09-25 12:01:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lcdshanshi

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-09-25 07:31:16
不同的抗血清差别很大的,建议先稀释个1000倍做一下看,根据结果再定稀释倍数。然后上不同量的样品确定抗体的线性范围。

1:100稀释今天看了下 ,一团黑 准备做个梯度。谢谢您的帮助!
相聚在M
8楼2012-09-25 12:01:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lcdshanshi

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by yuhan131481 at 2012-09-25 09:08:15
我们是1:100   不过最好做个梯度试验  看看

准备做个梯度。谢谢您的帮助!
相聚在M
9楼2012-09-25 12:02:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lcdshanshi

铁虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-09-24 23:53:52
嗯.................
       个人觉得需先ELISA确认效价后再来做吧,基本上血清我们一般都是2000~5000稀释,100左右的那是纯化后的稀释倍数。
       个人看法 若有说错请高手指点

刚开始我感觉血清因为没有纯化,里面的抗体少,所以用高浓度的,今天看了下结果,1S曝光就全黑了。 另外请问为什么纯化后的抗体反而稀释倍数低哪?
相聚在M
10楼2012-09-25 12:51:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lcdshanshi 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 找导师 +7 yuanjiabao 2026-08-29 8/400 2026-09-03 20:15 by yinnelly
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ero8OE6tv9cu 2026-09-02 5/250 2026-09-03 20:09 by jyNB2vrbdUpR
[基金申请] 面上没中,邀请各位路过的虫友分析一下分数 +3 jackleilei 2026-09-03 3/150 2026-09-03 19:13 by god_tian
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 YLHlRHNwYkce 2026-09-02 8/400 2026-09-03 18:50 by jyNB2vrbdUpR
[考研] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 YLHlRHNwYkce 2026-09-02 7/350 2026-09-03 18:50 by jyNB2vrbdUpR
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 YLHlRHNwYkce 2026-09-02 11/550 2026-09-03 18:42 by jyNB2vrbdUpR
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 rFEsUBKXRll0 2026-09-02 6/300 2026-09-03 16:49 by T0rGB46095mJ
[找工作] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 ero8OE6tv9cu 2026-09-02 8/400 2026-09-03 16:38 by T0rGB46095mJ
[硕博家园] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 ero8OE6tv9cu 2026-09-02 5/250 2026-09-03 16:38 by T0rGB46095mJ
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 ero8OE6tv9cu 2026-09-02 10/500 2026-09-03 16:27 by T0rGB46095mJ
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 YLHlRHNwYkce 2026-09-02 8/400 2026-09-03 12:03 by T0rGB46095mJ
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +8 gdd2018 2026-08-28 13/650 2026-09-03 06:22 by 羽毛枫f
[基金申请] 要骂人了,新模版改版就是要淡化问题凝练这种虚的东西,结果有个评委还在说凝练得不够 +9 瞬息宇宙 2026-08-31 17/850 2026-09-02 14:04 by anjeeshine
[基金申请] 学科评审组评审是指会评吗? +5 瞬息宇宙 2026-08-31 5/250 2026-09-02 10:13 by 雨冰共舞
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗? +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
信息提示
请填处理意见