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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 未纯化血清抗体做western blot时，按多少比例稀释
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lcdshanshi

铁虫 (小有名气)

[求助] 未纯化血清抗体做western blot时，按多少比例稀释

如题，肽段免疫的兔子，得到了一管未纯化的血清，准备用其做western blot，请问按多少比例稀释，是否可以5%的no-fat milk。另外用血清做一抗有没有需要注意的地方，相对于商品化的纯化抗体。
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相聚在M
1楼 2012-09-24 16:21:48
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lcdshanshi

铁虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-09-24 23:53:52
嗯.................
       个人觉得需先ELISA确认效价后再来做吧，基本上血清我们一般都是2000~5000稀释，100左右的那是纯化后的稀释倍数。
       个人看法 若有说错请高手指点

刚开始我感觉血清因为没有纯化，里面的抗体少，所以用高浓度的，今天看了下结果，1S曝光就全黑了。 另外请问为什么纯化后的抗体反而稀释倍数低哪？
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相聚在M
10楼2012-09-25 12:51:32
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼主可以试一下不同的梯度，找到一个最佳的稀释度，我们是这样做的
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jiayoubashaonian
2楼2012-09-24 20:59:57
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lcdshanshi

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by blackrose8089 at 2012-09-24 20:59:57
楼主可以试一下不同的梯度，找到一个最佳的稀释度，我们是这样做的

那请问你们一般都是一比多少？1:100吗？
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相聚在M
3楼2012-09-24 22:05:06
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
嗯.................
       个人觉得需先ELISA确认效价后再来做吧，基本上血清我们一般都是2000~5000稀释，100左右的那是纯化后的稀释倍数。
       个人看法 若有说错请高手指点
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lcdshanshi
Let God do with it as He wills
4楼2012-09-24 23:53:52
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查看全部 12 个回答
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