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lflishan

木虫 (著名写手)

[求助] western blot抗体选择与操作

如果一块胶转膜后需要用两种抗体,可以同时加两种抗体孵育吗?具体怎么操作呢?实验室没有人做过,急求助。。。另外,如果一种抗体是兔源的,而actin是鼠源的,二抗只有抗兔的,能用吗
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lflishan: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-01-14 22:20:19
1. 如果两个目标蛋白在胶上的位置有明显差别是可以的,如果你不在乎把一抗混合的话。如果同时做,注意两个抗体的检出限要差不多。如果一个抗体很弱一个很强的话,效果会很不好。我一般是孵育完一个一抗,洗膜后直接放另一个一抗孵育,这样可以根据抗体的灵敏程度确定孵育时间的长短。洗膜后加二抗,两个一起检测。
2. 肯定不行的。二抗是识别一抗的IgG, 抗兔的二抗只能识别兔的一抗。
4楼2013-01-14 15:33:18
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nlbtr

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lflishan: 金币+2, 有帮助 2013-01-14 22:19:46
第一个问题:可以同时孵育,我没做过,但是我知道有人做过,可以自己先摸索下,方法自己建立的才是最好的;
第二个问题,不行,要同源的。如果可以的话,二抗就不需要分来源了。
2楼2013-01-14 12:50:25
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xiaoqi5992

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lflishan: 金币+2, 有帮助 2013-01-14 22:19:56
第一个问题:理论上可以,但是有些抗体混合在一起会产生沉淀,如果不产生沉淀的话,你可以摸摸条件,和一种抗体标的操作差不多。
第二个问题:只能用同源的,抗兔的二抗对应兔来源的一抗。
3楼2013-01-14 13:14:59
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lflishan

木虫 (著名写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-14 15:33:18
1. 如果两个目标蛋白在胶上的位置有明显差别是可以的,如果你不在乎把一抗混合的话。如果同时做,注意两个抗体的检出限要差不多。如果一个抗体很弱一个很强的话,效果会很不好。我一般是孵育完一个一抗,洗膜后直接 ...

一抗说明书中写可以和其他一些动物的有交叉反应性,是什么意思呢?
5楼2013-01-15 09:54:44
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