应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » western blot没有结果是怎么回事~~
131/1返回列表
查看: 2966  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

马龙sweeting

木虫 (正式写手)

[交流] western blot没有结果是怎么回事~~

自己摸索着做western，但是做了3次western blot没有结果，也不知道是哪里有问题，换用别人的抗体也不行，我做western是菜鸟，也不知道究竟哪里出了问题，请各位老手能够提出一些我可能出问题的地方，不胜感激~~
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

蛋白质生物学实验经验

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-03-19 14:33:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

robustli

银虫 (小有名气)
★
马龙sweeting(金币+1): 谢谢参与
the best way to test your system is using a positive control.
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2013-03-20 04:11:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
马龙sweeting(金币+1): 谢谢参与
如果你用别人的抗体也不行，说明问题可能是胶、转膜或者是后面的detection。胶跑得怎么样？上样多少，是否染胶观察？此外，膜转得怎么样？有预染marker吗？一抗、二抗是否都好用。用什么检测？是曝光film吗？
赞一下 回复此楼
4楼2013-03-20 04:04:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

myfinalway

木虫 (正式写手)
★
马龙sweeting(金币+1): 谢谢参与
WB 步骤多，每一步都有可能影响，你要一个一个排除。
赞一下 回复此楼
6楼2013-03-20 09:54:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

concon123456

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
二抗用了免荧光的！
赞一下 回复此楼
7楼2013-03-21 09:57:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fengqingrusi

金虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
最好要有正对照，转膜是很关键的一步，如果没有转膜成功有可能就没有结果，还有就是加上预染的marker, 方便检测转膜效率和判断目的蛋白的大小。抗体的孵育也很关键，我们一般的做法是一抗在4度孵育过夜，让后洗三遍，二抗一般室温孵育一个小时就可以了。祝你好运！
赞一下 回复此楼
8楼2013-03-21 20:19:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cucu奶茶

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
做个内参看看出不出条带。若是出了，说明整个过程没问题。可以考虑适当升高一抗浓度。
赞一下 回复此楼
9楼2013-03-22 09:34:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

马龙sweeting

木虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by cucu奶茶 at 2013-03-22 09:34:40
做个内参看看出不出条带。若是出了，说明整个过程没问题。可以考虑适当升高一抗浓度。

我做的就是内参~~
赞一下 回复此楼
10楼2013-03-24 20:09:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

马龙sweeting

木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by fengqingrusi at 2013-03-21 20:19:09
最好要有正对照，转膜是很关键的一步，如果没有转膜成功有可能就没有结果，还有就是加上预染的marker, 方便检测转膜效率和判断目的蛋白的大小。抗体的孵育也很关键，我们一般的做法是一抗在4度孵育过夜，让后洗三遍 ...

我在别人的用我的样品实验室做的就没有问题~~怀疑可能是抗体的问题~~
赞一下 回复此楼
11楼2013-03-24 20:10:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

taomm

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
这个涉及的问题太多了。内参没出的话，看看你一二抗种属是否对应；转印是否成功（可以通过预染MARKER）确认；内参是否能在你的抗原上工作（这个一般会有商品说明）；试剂（特别是发光底物）是否合适。然后就是一二抗的工作稀释度。
赞一下 回复此楼
12楼2013-03-25 14:06:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

柳林竹风

银虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
刚做时，最好先联系做内参，内参若是出不来，再考虑其他因素~
赞一下 回复此楼
13楼2014-05-25 20:18:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
haixiawu2楼
2013-03-19 17:21   回复  
马龙sweeting(金币+1): 谢谢参与
yingying15883楼
2013-03-19 21:18   回复  
马龙sweeting(金币+1): 谢谢参与
相关版块跳转 我要订阅楼主 马龙sweeting 的主题更新
131/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭