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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » western blot没有结果是怎么回事~~
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马龙sweeting

木虫 (正式写手)

[交流] western blot没有结果是怎么回事~~

自己摸索着做western，但是做了3次western blot没有结果，也不知道是哪里有问题，换用别人的抗体也不行，我做western是菜鸟，也不知道究竟哪里出了问题，请各位老手能够提出一些我可能出问题的地方，不胜感激~~
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1楼2013-03-19 14:33:13
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taomm

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
这个涉及的问题太多了。内参没出的话，看看你一二抗种属是否对应；转印是否成功（可以通过预染MARKER）确认；内参是否能在你的抗原上工作（这个一般会有商品说明）；试剂（特别是发光底物）是否合适。然后就是一二抗的工作稀释度。
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12楼2013-03-25 14:06:28
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
马龙sweeting(金币+1): 谢谢参与
如果你用别人的抗体也不行，说明问题可能是胶、转膜或者是后面的detection。胶跑得怎么样？上样多少，是否染胶观察？此外，膜转得怎么样？有预染marker吗？一抗、二抗是否都好用。用什么检测？是曝光film吗？
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4楼2013-03-20 04:04:22
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robustli

银虫 (小有名气)
★
马龙sweeting(金币+1): 谢谢参与
the best way to test your system is using a positive control.
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5楼2013-03-20 04:11:33
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myfinalway

木虫 (正式写手)
★
马龙sweeting(金币+1): 谢谢参与
WB 步骤多，每一步都有可能影响，你要一个一个排除。
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6楼2013-03-20 09:54:22
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