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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » western blot时marker问题求助
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lhj851228

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

xiaotianh(金币+5): 2011-07-10 21:48:40
我用过几种Marker，还没出现lz的问题。我想可能是：1Marker上样量太低，我一般上8ul条带很清晰；2胶可能有问题； 3Marker质量问题

还有就是电泳时到底是换电压好，还是不换电压一直跑下去的好？我只做过换电压跑的。   学习交流
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11楼2011-07-10 16:30:55
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xiaotianh

捐助贵宾 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by lhj851228 at 2011-07-10 16:30:55:
我用过几种Marker，还没出现lz的问题。我想可能是：1Marker上样量太低，我一般上8ul条带很清晰；2胶可能有问题； 3Marker质量问题

还有就是电泳时到底是换电压好，还是不换电压一直跑下去的好？我只做过换电压 ...

恩，我第二天重复做了，结果很好。我觉得应该是我的胶的问题，可能那天做实验的时候没有注意，做胶的时候可能漏加了某种试剂，导致出现这样的结果。但是这种情况在我们实验室确实有过好几次了。谢谢大家热心的帮助啊。
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12楼2011-07-10 21:48:00
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zx1984

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

xiaotianh(金币+5): 2011-07-12 09:39:31
有可能是过硫酸铵的问题，影响了丙烯酰胺和双丙烯酰胺的交联，换一个新的过硫酸铵试试。还有现用15%的胶试试，你说的marker好像是10条带才对。
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13楼2011-07-11 19:26:40
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xiaotianh

捐助贵宾 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zx1984 at 2011-07-11 19:26:40:
有可能是过硫酸铵的问题，影响了丙烯酰胺和双丙烯酰胺的交联，换一个新的过硫酸铵试试。还有现用15%的胶试试，你说的marker好像是10条带才对。

谢谢，你的回答很有价值，那天的AP确实是用了一个多星期了，第二天我做的时候是重新配制的AP呢，谢谢你，真的很有用！
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14楼2011-07-12 09:40:27
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子曰包子好吃

银虫 (小有名气)
你用的是fermenta的marker吧  我也在用 5ul就很清楚了
准确的说是一共10条带 红色的是72 以上分别是90 130 170 以下是55 43 37 26 17
10（草绿色）其中170的比较淡 至于有多少条带显出来 跟你的胶的浓度有关 我这里转膜时间一般是100v 60min 很好的
你的marker是怎么保存的 应该在-20℃保存 每次用完后立刻放回 还有就是如果你的marker结冰的话 建议分装以下 避免反复冻融
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15楼2011-07-16 09:38:34
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天街小雨wmq

铜虫 (小有名气)
Marker的问题吧，也可能是胶制得不好。如果是你们实验室的普遍问题的话，LZ还是检查下制胶的各种试剂是不是有的过期，或者污染了
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寻梦
16楼2011-07-20 23:02:25
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匿名

用户注销 (小有名气)
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17楼2011-07-21 14:24:27
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kly312254857

铁虫 (初入文坛)
我觉着可能是胶不均吧
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18楼2012-03-02 23:49:31
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nosema

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你用的分离胶是多少啊？我用12%的从没出现过这种现象，见过其它实验室用10%，Maker缺失条带的现象，希望能给你一定启示

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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要做就做最好！
19楼2012-03-05 12:57:29
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