应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » western blot时marker问题求助
52/1返回列表
查看: 5671  |  回复: 18
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

xiaotianh

捐助贵宾 (小有名气)

[求助] western blot时marker问题求助

今天做了一次WB,发现marker没有跑开，应该有九条带，其中红色的是72KD，72KD上面有三条，下面应该有5条带。
但是今天跑出来的条带是红色的明显，但是，72KD以下只有2条，以上也只有隐约可见的2条。
电泳液是新鲜配置的，而且我们实验室不是第一次出现这个情况有，希望能有高手帮忙分析一下是哪里出现了问题吗？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2011-07-08 15:05:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaotianh

捐助贵宾 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zx1984 at 2011-07-11 19:26:40:
有可能是过硫酸铵的问题，影响了丙烯酰胺和双丙烯酰胺的交联，换一个新的过硫酸铵试试。还有现用15%的胶试试，你说的marker好像是10条带才对。

谢谢，你的回答很有价值，那天的AP确实是用了一个多星期了，第二天我做的时候是重新配制的AP呢，谢谢你，真的很有用！
赞一下 回复此楼
14楼2011-07-12 09:40:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答

a83875785

铁杆木虫 (著名写手)
转膜时间和电压是多少，是什么方式转膜呢？
赞一下 回复此楼
2楼2011-07-08 15:48:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaotianh

捐助贵宾 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by a83875785 at 2011-07-08 15:48:34:
转膜时间和电压是多少，是什么方式转膜呢？

不是，我不是转膜出了问题，是电泳那一步Marker跑不开。本来应该有九条带的marker，今天做的时候只出来五条带。不知道是为什么？转膜是没问题的。

电泳的条件是70V，恒压，120min，从浓缩胶到分离胶不变电压，一直往下跑。一般来说都是正常的，但是偶尔我们实验室也会出现像今天这样的marker跑不开的情况，不知道为什么？
赞一下 回复此楼
3楼2011-07-08 16:34:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a83875785

铁杆木虫 (著名写手)
我有时候marker也看不到，一般是转膜转过了。
否则就是market本身的问题了。
赞一下 回复此楼
4楼2011-07-08 18:12:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭