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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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xiaotianh

新虫

[求助] western blot时marker问题求助

今天做了一次WB,发现marker没有跑开,应该有九条带,其中红色的是72KD,72KD上面有三条,下面应该有5条带。
但是今天跑出来的条带是红色的明显,但是,72KD以下只有2条,以上也只有隐约可见的2条。
电泳液是新鲜配置的,而且我们实验室不是第一次出现这个情况有,希望能有高手帮忙分析一下是哪里出现了问题吗?
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a83875785

管理员

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

我有时候marker也看不到,一般是转膜转过了。
否则就是market本身的问题了。
4楼2011-07-08 18:12:57
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a83875785

管理员

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

转膜时间和电压是多少,是什么方式转膜呢?
2楼2011-07-08 15:48:34
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xiaotianh

新虫

引用回帖:
Originally posted by a83875785 at 2011-07-08 15:48:34:
转膜时间和电压是多少,是什么方式转膜呢?

不是,我不是转膜出了问题,是电泳那一步Marker跑不开。本来应该有九条带的marker,今天做的时候只出来五条带。不知道是为什么?转膜是没问题的。

电泳的条件是70V,恒压,120min,从浓缩胶到分离胶不变电压,一直往下跑。一般来说都是正常的,但是偶尔我们实验室也会出现像今天这样的marker跑不开的情况,不知道为什么?
3楼2011-07-08 16:34:22
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juliana_zou11

实习版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励应助 2011-07-08 20:11:37
增加上样量试试
之前我们做一般上2ul Marker,转膜之后很淡,甚至15kd的都几乎看不出来
有个人上了10ul大家一看,哇太清晰了
如果还是不行就是你的胶配的不是很好。胶如果不均一跑电泳会比较难看,而且marker可能跑不开,挤在一起
5楼2011-07-08 18:38:41
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