24小时热门版块排行榜    

查看: 5489  |  回复: 18

xiaotianh

捐助贵宾 (小有名气)

[求助] western blot时marker问题求助

今天做了一次WB,发现marker没有跑开,应该有九条带,其中红色的是72KD,72KD上面有三条,下面应该有5条带。
但是今天跑出来的条带是红色的明显,但是,72KD以下只有2条,以上也只有隐约可见的2条。
电泳液是新鲜配置的,而且我们实验室不是第一次出现这个情况有,希望能有高手帮忙分析一下是哪里出现了问题吗?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a83875785

铁杆木虫 (著名写手)

转膜时间和电压是多少,是什么方式转膜呢?
2楼2011-07-08 15:48:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaotianh

捐助贵宾 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by a83875785 at 2011-07-08 15:48:34:
转膜时间和电压是多少,是什么方式转膜呢?

不是,我不是转膜出了问题,是电泳那一步Marker跑不开。本来应该有九条带的marker,今天做的时候只出来五条带。不知道是为什么?转膜是没问题的。

电泳的条件是70V,恒压,120min,从浓缩胶到分离胶不变电压,一直往下跑。一般来说都是正常的,但是偶尔我们实验室也会出现像今天这样的marker跑不开的情况,不知道为什么?
3楼2011-07-08 16:34:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

a83875785

铁杆木虫 (著名写手)

我有时候marker也看不到,一般是转膜转过了。
否则就是market本身的问题了。
4楼2011-07-08 18:12:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

juliana_zou11

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励应助 2011-07-08 20:11:37
增加上样量试试
之前我们做一般上2ul Marker,转膜之后很淡,甚至15kd的都几乎看不出来
有个人上了10ul大家一看,哇太清晰了
如果还是不行就是你的胶配的不是很好。胶如果不均一跑电泳会比较难看,而且marker可能跑不开,挤在一起
5楼2011-07-08 18:38:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiewenjie

新虫 (初入文坛)

学习一下
6楼2011-07-09 08:50:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张力民1598

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我觉得有以下可能:
1.胶浓度问题2.marker质量问题。
7楼2011-07-09 09:32:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

txfxxx54

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我觉得也是你的marker存在问题,我们买过七八种marker,也没有遇到多这种情况,你可以联系商家,然后给你们换换。
Wholaughslast,wholaughsbest!!
8楼2011-07-09 20:10:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

txfxxx54

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

虽然没有遇到楼主的这种问题,但是我在做WB时遇到了各种各样的其他问题,比如重复性太差,一次一次实验不一样,同一东西同样条件转膜,第一次出来条带,后一次却怎么也出不来?大家有遇到过吗?
Wholaughslast,wholaughsbest!!
9楼2011-07-09 20:18:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

txfxxx54

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

虽然没有遇到楼主的这种问题,但是我在做WB时遇到了各种各样的其他问题,比如重复性太差,一次一次实验不一样,同一东西同样条件转膜,第一次出来条带,后一次却怎么也出不来?大家有遇到过吗?
Wholaughslast,wholaughsbest!!
10楼2011-07-09 20:19:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xiaotianh 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +22 yaoyewhu2008 2026-08-20 24/1200 2026-08-21 07:44 by DanielDDDD
[基金申请] 基金啊基金 +3 longfie172 2026-08-20 3/150 2026-08-21 00:04 by wuchongjun
[基金申请] 让我中一个面上吧! +8 大萍1987 2026-08-20 10/500 2026-08-20 21:48 by 大萍1987
[基金申请] 言之凿凿,明天官网会通知放榜? +15 医学老男孩 2026-08-20 17/850 2026-08-20 20:35 by CaoLG
[基金申请] 时间戳又变了 +12 wuchongjun 2026-08-20 17/850 2026-08-20 20:05 by spzhao
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+3 snowwithsea 2026-08-19 12/600 2026-08-20 15:56 by lfy8008
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低?主要原因有哪些? +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +4 yuleib84 2026-08-19 5/250 2026-08-19 19:52 by hhs666
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +10 wangze12014 2026-08-14 12/600 2026-08-19 16:56 by 苦难博士
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 什么时候开奖? +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
信息提示
请填处理意见