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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » western blot时marker问题求助
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xiaotianh

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[求助] western blot时marker问题求助

今天做了一次WB,发现marker没有跑开，应该有九条带，其中红色的是72KD，72KD上面有三条，下面应该有5条带。
但是今天跑出来的条带是红色的明显，但是，72KD以下只有2条，以上也只有隐约可见的2条。
电泳液是新鲜配置的，而且我们实验室不是第一次出现这个情况有，希望能有高手帮忙分析一下是哪里出现了问题吗？
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1楼 2011-07-08 15:05:59
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lhj851228

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

xiaotianh(金币+5): 2011-07-10 21:48:40
我用过几种Marker，还没出现lz的问题。我想可能是：1Marker上样量太低，我一般上8ul条带很清晰；2胶可能有问题； 3Marker质量问题

还有就是电泳时到底是换电压好，还是不换电压一直跑下去的好？我只做过换电压跑的。   学习交流
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11楼2011-07-10 16:30:55
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a83875785

铁杆木虫 (著名写手)
转膜时间和电压是多少，是什么方式转膜呢？
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2楼2011-07-08 15:48:34
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xiaotianh

捐助贵宾 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by a83875785 at 2011-07-08 15:48:34:
转膜时间和电压是多少，是什么方式转膜呢？

不是，我不是转膜出了问题，是电泳那一步Marker跑不开。本来应该有九条带的marker，今天做的时候只出来五条带。不知道是为什么？转膜是没问题的。

电泳的条件是70V，恒压，120min，从浓缩胶到分离胶不变电压，一直往下跑。一般来说都是正常的，但是偶尔我们实验室也会出现像今天这样的marker跑不开的情况，不知道为什么？
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3楼2011-07-08 16:34:22
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a83875785

铁杆木虫 (著名写手)
我有时候marker也看不到，一般是转膜转过了。
否则就是market本身的问题了。
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4楼2011-07-08 18:12:57
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