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xiaotianh

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[求助] western blot时marker问题求助

今天做了一次WB,发现marker没有跑开,应该有九条带,其中红色的是72KD,72KD上面有三条,下面应该有5条带。
但是今天跑出来的条带是红色的明显,但是,72KD以下只有2条,以上也只有隐约可见的2条。
电泳液是新鲜配置的,而且我们实验室不是第一次出现这个情况有,希望能有高手帮忙分析一下是哪里出现了问题吗?
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子曰包子好吃

银虫 (小有名气)

你用的是fermenta的marker吧  我也在用 5ul就很清楚了
准确的说是一共10条带 红色的是72 以上分别是90 130 170 以下是55 43 37 26 17
10(草绿色)其中170的比较淡 至于有多少条带显出来 跟你的胶的浓度有关 我这里转膜时间一般是100v 60min 很好的
你的marker是怎么保存的 应该在-20℃保存 每次用完后立刻放回 还有就是如果你的marker结冰的话 建议分装以下 避免反复冻融
15楼2011-07-16 09:38:34
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a83875785

铁杆木虫 (著名写手)

转膜时间和电压是多少,是什么方式转膜呢?
2楼2011-07-08 15:48:34
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xiaotianh

捐助贵宾 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by a83875785 at 2011-07-08 15:48:34:
转膜时间和电压是多少,是什么方式转膜呢?

不是,我不是转膜出了问题,是电泳那一步Marker跑不开。本来应该有九条带的marker,今天做的时候只出来五条带。不知道是为什么?转膜是没问题的。

电泳的条件是70V,恒压,120min,从浓缩胶到分离胶不变电压,一直往下跑。一般来说都是正常的,但是偶尔我们实验室也会出现像今天这样的marker跑不开的情况,不知道为什么?
3楼2011-07-08 16:34:22
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a83875785

铁杆木虫 (著名写手)

我有时候marker也看不到,一般是转膜转过了。
否则就是market本身的问题了。
4楼2011-07-08 18:12:57
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