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zct2008

至尊木虫 (著名写手)

[求助] 求助:基因组文库构建时一般用什么Marker?

本人正在构建一个细菌基因组文库,按照《分子克隆实验指南》,提取全基因组以后用Sau3AI进行部分酶切,然后电泳分离30-45kb大小的片段。想请教一下大家:电泳分离30-45kb大小的片段时一般用什么Marker?一般常用的Marker没有这么大的,不知道大家都是用什么作为分子量标准的?请做过基因组文库构建的朋友帮忙,非常感谢!
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天行健,君子以自强不息;地势坤,君子以厚德载物。
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srlee

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

zct2008(金币+2): 谢谢您的回复!我试一试,如有问题再请教你,呵呵…… 2011-07-08 15:35:05
引用回帖:
Originally posted by 他她0328 at 2011-07-07 21:33:30:
λHindIII 最大指示条带不是才23K么,怎么指示30-40K的啊。。。

λHindIII 最大条带确实是23Kb,如果是低电压过夜电泳(脉冲场电泳就另说了)的话,建文库要割胶回收的30-40K条带也就在23kb上面一点点,如果建文库时找不到40kb左右的marker完全可以用它指示一下,等你做的多了就明白了。
另,回答楼上zct2008关于试剂盒问题,我们实验室常用EPICENTRE公司的cosmid或fosmid试剂盒。
8楼2011-07-08 10:46:14
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查看全部 13 个回答

zct2008

至尊木虫 (著名写手)

自己顶一下,继续求助。
有没有做过基因组文库构建的朋友?请帮帮忙,非常感谢!
天行健,君子以自强不息;地势坤,君子以厚德载物。
2楼2011-06-01 20:35:28
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-06-02 09:07:52
40多KB的可以用λ线性DNA,20多KB的可以用λ/EcoRⅠ,最大的一条带是21.6kb,这两个Ladder分两个泳道上样,割中间区域的胶。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
3楼2011-06-02 01:13:09
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他她0328

银虫 (小有名气)

我要构建的是链霉菌的基因组文库,回收的是30-42kb之间的片段,也在找合适的marker。。。
4楼2011-07-03 19:18:46
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