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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助：基因组文库构建时一般用什么Marker？
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zct2008

至尊木虫 (著名写手)

[求助] 求助：基因组文库构建时一般用什么Marker？

本人正在构建一个细菌基因组文库，按照《分子克隆实验指南》，提取全基因组以后用Sau3AI进行部分酶切，然后电泳分离30-45kb大小的片段。想请教一下大家：电泳分离30-45kb大小的片段时一般用什么Marker？一般常用的Marker没有这么大的，不知道大家都是用什么作为分子量标准的？请做过基因组文库构建的朋友帮忙，非常感谢！
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天行健，君子以自强不息；地势坤，君子以厚德载物。
1楼 2011-05-30 09:27:26
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他她0328

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by srlee at 2011-07-08 10:46:14:
λHindIII 最大条带确实是23Kb，如果是低电压过夜电泳（脉冲场电泳就另说了）的话，建文库要割胶回收的30-40K条带也就在23kb上面一点点，如果建文库时找不到40kb左右的marker完全可以用它指示一下，等你做的多 ...

我要跑的就是脉冲场电泳。。。那还能不能用λHindIII ？分离大片段DNA是不是一定要用脉冲场电泳？
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9楼2011-07-08 14:34:02
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zct2008

至尊木虫 (著名写手)
自己顶一下，继续求助。
有没有做过基因组文库构建的朋友？请帮帮忙，非常感谢！
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天行健，君子以自强不息；地势坤，君子以厚德载物。
2楼2011-06-01 20:35:28
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★
dhd997(金币+2): good 2011-06-02 09:07:52
40多KB的可以用λ线性DNA，20多KB的可以用λ/EcoRⅠ，最大的一条带是21.6kb，这两个Ladder分两个泳道上样，割中间区域的胶。
赞一下(1人) 回复此楼
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
3楼2011-06-02 01:13:09
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他她0328

银虫 (小有名气)
我要构建的是链霉菌的基因组文库，回收的是30-42kb之间的片段，也在找合适的marker。。。
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4楼2011-07-03 19:18:46
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