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hanxganvet

木虫 (正式写手)

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[交流] 【求助/交流】如何构建细菌的基因组表达文库

各位大侠，本人现在正在做细菌的基因组表达文库，遇到一些问题，想向论坛里的高手请教

   细菌基因组文库构建时细菌基因组和载体连接比例如何？
   构建一个500-3000bp的文库，克隆数在4万个左右，大约需要多少载体和基因组？

   连接时那个公司的连接酶比较好？
去磷酸化时用碱性磷酸酶时，使用那个剂量比较好？
构建文库必须用电转化吗？化学转化行不行？
在线急等，越详细越好，谢谢了

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lingsheshidu

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1楼 2011-01-10 20:13:36

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hraikeyan

金虫 (小有名气)

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★
hanxganvet(金币+1): 谢谢参与

引用回帖:

155870楼: Originally posted by brightfuture01 at 2011-01-10 20:50:00
比例的问题要自己摸索。

载体和基因组的需求量视你的转化率及转化次数而定。一次提够就行了。

NEB、Promega的T4较好用

去磷酸化能用SAP则不用CIAP，用量根据推荐的来就OK。

为达克隆总数，转化次数越少 ...

您好,请问通过蓝白斑筛选是不是可以排除掉大部分的自连克隆？